Tesis doctoral de Esther Barreiro Portela
El óxido nítrico (no) y las especies oxigenadas reactivas (ros) se sintetizan constitutivamente en el músculo esquelético, y son producidas abundamentamente en procesos activos inflamatorios, como la sepsis. estas moléculas regulan el proceso de contracción del músculo normal y séptico. De entre las modificaciones moleculares atribuibles al no, la más estudiada es la nitrificación del aminoácido tirosina y consecuente formación de 3-nitrotirosina. Las hemo-oxigenasas (hos), enzimas limitantes del catabolismo del grupo hermo, tienen efecftos protectores a nivel celular frente al estrés oxidativo. Evaluamos el papel de las sintetasas del no (nos) y de las hos sobre la formación de radicales nitrificantes y oxidantes en la disfunción muscular contráctil inducida por la sepsis. La sepsis se indujo mediante inyección de 20 mg/kg del lipopolisacárido de escherichia boli a ratas y a ratones de deficientes en las isoformas de las nos (knockout mice) inducible (inos), neuronal (nnos), y endotelial (enos). La medición de la inmunoreactividad de 3-nitrotirosina se utilizó como medida indirecta de la formación de peroxinitrito (reacción entre el no y el anión superóxido o2). Se nidieron la oxidación proteica (grupos carbonilo), la peroxidación lipídica (conjugados proteicos hidroxinonenales) y las concentraciones musculares de glutation, como índices indirectos de estrés oxidativo. Las expresiones proteicas de las hos se determinaron mediante anticuerpos anti-ho-i y -ho-2. Se administró un inhibidor selectivo de la actividad de las hos a algunos grupos de ratas y se hicieron estudios de contractilidad para la evaluación de su significado biológico en el músculo normal y séptico. Los resultados más importantes son que el proceso de nitrificación de proteínas abundante en el músculo normal, que estas proteínas localizan en la fracción citosólica, y que tienen unos pesos moleculares aparentes entre 10 y 66 kda. El incremento de proteínas nitrificadas inducido por la sepsis está limitado a las fracciones mitocondrial y de membrana. La inhibición sistémica de la actividad de las nos dio lugar a un incremento de la oxidación protéica, de la proxidación lipídica y a un descenso substancial de la fuerza de contracción diafragmática. Se ha demostrado que la isoforma inos juega un papel importante en la nitrificación de proteínas en el músculo normal y en la sepsis, sin regular la expresión de la hos. Concluimos que el fenómeno de estrés «nitrificativo» eestá presente en el músculo normal, y que la sepsis induce un aumento de proteínas nitrificadas. Las hos protegerían el aparato contrácil muscular de los efectos deletéreos de las ros tanto en el músculo normal como en el séptico.
Datos académicos de la tesis doctoral «Study of reactive oxygen species (ros) and nitric oxide (no) as molecular mediators of the sepsis-induced diaphragmatic contractile dysfunction. protective effect of heme oxygenases«
- Título de la tesis: Study of reactive oxygen species (ros) and nitric oxide (no) as molecular mediators of the sepsis-induced diaphragmatic contractile dysfunction. protective effect of heme oxygenases
- Autor: Esther Barreiro Portela
- Universidad: Pompeu fabra
- Fecha de lectura de la tesis: 18/06/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Sabah N. A. Hussain
- Tribunal
- Presidente del tribunal: robert Rodríguez roisin
- josep María Anto boque (vocal)
- joan María Broquetas doñate (vocal)
- Miguel Lopez botet arbona (vocal)