Tesis doctoral de Clara Beatriz García Calderón
Salmonella es un patógeno intracelular que causa enfermedad sistémica, gastroenteritis o aborto. La virulencia de muchas bacterias patógenas está mediada por sistemas de dos componentes, que transmiten estímulos externos, generando una respuesta específica. El sistema rcs es un sistema de dos componentes formado por las proteínas de membrana interna, rcsc y rcsd, y el regulador de respuesta rcsb, que es un factor transcripcional. Se sabe que mutaciones en determinados genes, como igaa, conllevan la activación del sistema. Este gen es esencial, y mutaciones viables en el mismo atenúan la virulencia de salmonella. El objetivo de este trabajo fue el estudio del regulón igaa-rcs. inicialmente se obtuvo una batería de mutantes rcsc con activación constitutiva del sistema. Se caracterizaron once mutaciones, todas en la porción citoplásmica de la proteína. La mayoría eran dominantes, excepto dos, situadas en el dominio receptor de la proteína. Los distintos mutantes eran mucosos, inmóviles y exhibían diferentes grados de activación del sistema rcs. Ensayos de infección en ratones demostraron que todos los mutantes estaban muy atenuados, y que la atenuación correlacionaba con el grado de activación del sistema. Los fenotipos de estos mutantes eran suprimidos por mutaciones en el gen rcsb. Mutaciones en gmm o rcsa (implicados en la síntesis de cápsula de ácido colánico) suprimían parcialmente la avirulencia del mutante rcsc constitutivo, lo que sugiere que la sobreproducción de cápsula desempeña un papel negativo en la virulencia de salmonella. se generó una colección de fusiones transcripcionales lacz aleatorias en el cromosoma de salmonella, y se comparó la expresión en condiciones de alta y baja activación del sistema rcs. Así se identificaron trece genes regulados por rcs, algunos específicos de salmonella como los del operón srfabc, cuyos productos se habían descrito como posibles efectores de un sistema de secreción de tipo iii. Ensayos de secreción indicaron que la proteína srfc podía ser secretada por este mecanismo. El estudio de este operón indicó que estaba regulado negativamente tanto por el sistema rcs como por el sistema phopq, lo que nos hizo plantearnos que existiese una relación más amplia entre ambos regulones. Los ensayos en ratones con mutantes dobles y simples demostraron que, en efecto, existía un solapamiento parcial entre ambos regulones en las funciones de virulencia en la última parte de la tesis realizamos un estudio del gen igaa en el que caracterizamos el punto de inicio de la transcripción y demostramos que igaa es el primer gen de un operón compuesto por cuatro genes cuya transcripción es dependiente del factor sigma-70. Mediante un escrutinio genético basado en fusiones igaa::lacz, encontramos que este operón está regulado a nivel transcripcional por la proteasa lon y por el regulador de respuesta mvia. Experimentos adicionales demostraron que mvia controla la transcripción de igaa por medio de rpos y que ejerce además un control postranscripcional sobre rcsb, por una vía independiente de igaa, rpos y rcsc.
Datos académicos de la tesis doctoral «Contribución del regulón rcs a la virulencia de salmonella: análisis genético y molecular«
- Título de la tesis: Contribución del regulón rcs a la virulencia de salmonella: análisis genético y molecular
- Autor: Clara Beatriz García Calderón
- Universidad: Sevilla
- Fecha de lectura de la tesis: 22/01/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Francisco Ramos Morales
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Carlos Martín montañés
- María dolores Tortolero García (vocal)
- Francisco Garcia del portillo (vocal)
- iñigo Lasa uzcudun (vocal)