Tesis doctoral de Montserrat Bosch Grau
Con la finalidad de estudiar las bases moleculares de la citotoxicitad de las ribonucleasa pancreáticas, se construyeronn diversas variantes dela hp-rnasa utizando dos estrategias distintas.En la primera se generarón variantes del enzima resistentes a la acción del inhibidor proteico de ribonucleasas (rhi) mediante la sustitución de residuos implicados en la interficie de contacto entre la ribonucleasas y el (rhi). En la segunda, se añadió el motivo rgd en regiones de superficie de la proteína implicadas también en la formación del complejo con el (rhi) . De esta forma se pretendía promover simultáneamente la interacción del enzima con la membrana celular y la reducción de su intercción con el inhibidor.Se comprobó que sólo las variantes portadoras de múltiples sustituciones eran capaces de evitar la intercción con el inhibidor. el estudio del porcentaje de inhibición de la síntesis proteica en células incubadas con cada una de las variantes mostró que sólo dos de ellas adqurían propiedades citotóxicas.Sorprendentemente, la variente más citotóxica de entre estas resultó ser sensible al hri. Se trata de pe5, y presenta un valor de ic50 solamente entre 5 y 15 veces inferior a los presentados por la onconasa. Este resultado demuestra que la sensibilidad al hri no es un facto imprescindible para la toxicidad de las ribonucleasas.Así mismo, ninguna de las variantes portadoras del motivo rgd adquirió capacidades citotóxicas. los análisis de internalización de las variantes marcadas radiactivamente demostraron que sólo la onconasa es internalizada eficazmente durante las primeras 7h de incubación. Se descarta de esta manera la posibilidad de que las propiedades citotóxica de pd5 sean el resultado de una mayor eficiencia de endocitosis. También se comprobó que la adición del motivo rgd no es capaz de promover la internalización de las proteínas que lo contienen . Mediante microscopia confocal de fluore
Datos académicos de la tesis doctoral «Producció i caracterització de variants de la ribonucleasa pancreática humana dissenyades per adquirir propietats citotoxiques«
- Título de la tesis: Producció i caracterització de variants de la ribonucleasa pancreática humana dissenyades per adquirir propietats citotoxiques
- Autor: Montserrat Bosch Grau
- Universidad: Girona
- Fecha de lectura de la tesis: 18/12/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Vilanova Brugués
- Tribunal
- Presidente del tribunal: claudi Cuchillo foix
- Antonio Villaverde corrales (vocal)
- beaumelle Bruno (vocal)
- Antonio Planas sauter (vocal)