Tesis doctoral de Pilar María Hernández Campo
La hpn es una enfermedad rara cuya patogenia se ha aclarado en gran medida a nivel molecular en los últimos años. En este trabajo nos hemos propuesto profundizar en el conocimiento de los mecanismos moleculares potencialmente responsables de la heterogeneidad observada en el comportamiento clínico y biológico de los pacientes con hpn. en primer lugar, evaluamos diferentes técnicas para el análisis de la expresión de cd55 y cd59 por citometría de flujo en subpoblaciones mayoritarias de leucocitos de sangre periférica y observamos que el empleo de una técnica en la que la eliminación de los hematíes de la muestra precede al marcaje de los leucocitos, permite optimizar el marcaje para ambas proteínas. Asimismo, el uso de una técnica de marcaje en ausencia de lisis y lavado, permite el análisis simultáneo de la expresión de cd55 y cd59 en hematíes, plaquetas y en las tres poblaciones mayoritarias de leucocitos circulantes y representa un nuevo método, rápido, simple y reproducible para el rastreo diagnóstico de hpn en muestras de sp. el análisis de la expresión de las proteínas asociadas a gpi en subpoblacioens celulares de sp muestra que, aunque el uso combinado de cd55 y cd59 es muy útil para el diagnóstico de hpn, no resulta óptimo a la hora de evaluar el grado de afectación de algunas subpoblaciones de leucocitos y plaquetas. Para algunas poblaciones, como los neutrófilos, existe un amplio panel de marcadores útiles, mientras que para otras, el número de antígenos útiles es más restringido o está limitado a un solo marcador de los analizados en el presente estudio. La expresión de la mayoría de estas proteínas varía durante la maduración normal en mo, observándose diferentes patrones de expresión en función de la línea celular y/o las proteínas analizadas. Estos resultados constituyen un marco de referencia para el estudio de muestras de pacientes con hpn. de acuerdo con nuestros resultados, la mejor combinación de marcadores para el rastreo diagnóstico de hpn incluiría la evaluación de cd14 en monocitos y cd16 en neutrófilos, ya que ambos marcadores permiten la identificación inequívoca de células hpn en todos los pacientes analizados y el mayor porcentaje de células afectadas correspondía de forma sistemática a estas dos poblaciones celulares. La ausencia de una asociación clara entre el genotipo y el fenotipo del clon hpn, junto con la expresión alterada de varias proteínas asociadas a gpi en células normales de pacientes con hpn, sugiere que el fenotipo de las células deficientes podría depender no sólo del tipo de mutación del gen pig-a, sino también de otros factores asociados al microambiente celular.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización fenotípica y molecular de células hematopoyéticas clonales en pacientes con hemoglobinuria paroxística nocturna: correlación con las características clínico-biológicas de la enfermedad.«
- Título de la tesis: Caracterización fenotípica y molecular de células hematopoyéticas clonales en pacientes con hemoglobinuria paroxística nocturna: correlación con las características clínico-biológicas de la enfermedad.
- Autor: Pilar María Hernández Campo
- Universidad: Salamanca
- Fecha de lectura de la tesis: 14/12/2007
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- José Alberto Orfao De Matos Correia E Vale
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jesús fernando San Miguel izquierdo
- florinda Gilsanz rodriguez (vocal)
- Francisco Javier Fernández calvo (vocal)
- Ana Villegas martínez (vocal)