Tesis doctoral de Isabel García López
En este trabajo de tesis doctoral, se estudió la incidencia de bacterias pertenecientes al género psychrobacter entre la microbiota psicrotrofa presente en muestras de carne y de moluscos bivalvos. Para ello se tomaron al azar 117 aislamientos, de los cuales 12 (10,2 %) se adscribieron al género psychrobacter, ya que fueron positivos para el ensayo de transformación empleando una cepa mutante de p. Immobilis, auxótrofa para hipoxantina. Seis de estos aislamientos procedían de carne y seis de moluscos. Asimismo, también se utilizaron, con fines comparativos, 15 cepas de la especie p. Immobilis obtenidas de distintas colecciones de cultivo. el sistema api 20ne no permitió la adscripción a especie de estos 12 aislamientos, pero sí obtener datos fenotípicos, al igual que las galerías api zym y api 50ch. En total se analizaron 140 caracteres fenotípicos, que permitieron establecer las características comunes de los aislamientos de las cepas de alimentos y las cepas de colección, como la capacidad de degradar la urea, la formación de ácido a partir de glucosa, xilosa y arabinosa, la actividad fosfatasa alcalina, esterasa y esterasa lipasa, la resistencia a concentraciones elevadas de cloruro sódico y la resistencia a algunos antibióticos beta-lactámicos y lincosamidas. el análisis filogenético, mediante la secuenciación del gen que codifica para el arnr 16s demostró que los aislamientos pertenecen al género psychrobacter, pero la adscripción a especie por este sistema resulto más difícil, ya que los resultados eran diferentes en función de la base de datos utilizada. Sin embargo, el ribotipado permitió establecer relaciones filogenéticas entre las cepas de una forma coherente y reproducible. por otra parte, se estudió la capacidad de los aislamientos para manifestar algunas actividades metabólicas relacionadas con la patogenicidad bacteriana, como proteolisis, lipólisis y mecanismos de captación de hierro, comprobando que son bacterias lipolíticas y proteolíticas, aunque con mayor actividad sobre sustratos que suelen estar presentes en alimentos, como tributirina o caseína, que sobre moléculas presentes en tejidos humanos. También son hemolíticas sobre eritrocitos de diversos orígenes, obteniéndose los resultados más uniformes con eritrocitos de oveja, y poseen capacidad de incorporar rojo congo. En resumen, las cepas de psychrobacter presentan varias actividades que en algunos microorganismos se relacionan con la patogenicidad. para facilitar la detección de las bacterias del género psychrobacter a partir de alimentos se desarrollaron dos métodos novedosos. Por una parte, se diseñó una técnica de pcr basada en la amplificación del gen de la lipasa lip1 que permite la amplificación específica de un fragmento de 420 pb en bacterias del género psychrobacter, sin obtener amplificación cuando se utilizan microorganismos de otras especies que pueden causar confusión, como pseudomonas fragi o aeromonas hydrophila. Por otro lado, se formuló un medio de cultivo sólido, con una base nutritiva y la adición de cloruro amónico, cloruro sódico y rojo congo, que permite la diferenciación fácil de los microorganismos del género psychrobacter, de otros con los que comparten hábitat y características, principalmente del género pseudomonas. La utilidad de este medio se puso de manifiesto mediante el análisis de muestras de alimentos proteicos de origen animal (leche, pescado, moluscos y carne) inoculadas intencionadamente con diversas concentraciones de microorganismos pertenecientes estos dos géneros.
Datos académicos de la tesis doctoral «Incidencia y caracterización de psychrobacter spp. en alimentos de origen animal«
- Título de la tesis: Incidencia y caracterización de psychrobacter spp. en alimentos de origen animal
- Autor: Isabel García López
- Universidad: León
- Fecha de lectura de la tesis: 01/07/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Luisa Garcia Lopez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: andrés Otero carballeira
- Mª del mar Rodríguez jovita (vocal)
- María nieves Rodríguez cousiño (vocal)
- María isabel González alonso (vocal)