Tesis doctoral de Fernando Picazo Sanchez
En las dos últimas décadas se han conseguido monitorizar cambios bioquímicos que ocurren en el interior de células vivas mediante el diseño y síntesis de sondas moleculares que penetran en las mismas, se unen a iones o ligandos celulares, y proporcionan una señal fluorescente cuantificable externamente. Así, se puede destacar el éxito de indicadores para calcio como el fura-2. Las gfps, dentro de su amplio uso en biología celular, han revolucionado el campo de los indicadores fluorescentes, permitiendo construir sondas recombinantes que se introducen en las células mediante transfección y que permiten generar organismos transgénicos. De esta forma se pueden construir sensores para el estudio de procesos celulares basados en diferentes técnicas de detección, entre las que destaca fret y las gfps permutadas circularmente. en esta tesis abordamos el diseño y caracterización de indicadores fluorescentes como herramienta de estudio de distintos procesos que ocurren en el interior de las células vivas. Con ayuda de las bien conocidas proteínas fluorescentes verdes (gfps, green fluorescent proteins) y el fenómeno de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (fret, fluorescence resonance energy transfer) hemos construido sensores para el estudio de receptores nucleares: receptor de estrógeno (er, estrogen receptor) y receptor de progesterona (pr, progesterone receptor). Además, como alternativa a estos indicadores basados en fret, hemos desarrollado sensores para la detección de ligandos de er basados en proteínas fluorescentes permutadas circularmente, en las cuales cambian las características espectrales dependiendo de su estado de protonación. También hemos construido sensores para la detección de actividad de la proteasa ns3/4a del virus de la hepatitis c (hcv, hepatitis c virus). este tipo de sensores podrían ser utilizados para identificar sustancias con capacidad de unión a er y pr en librerías de compuestos en la industria farmacéutica, y permitiría caracterizar la afinidad ligando-receptor. Los indicadores de actividad protesasa de hcv servirán tanto para la búsqueda de inhibidores para terapia antiviral, como para la caracterización de variantes de los distintos genotipos de hcv.
Datos académicos de la tesis doctoral «Detección de hormonas esteroides y actividad de la proteasa ns3 del virus de la hepatitis c mediante indicadores fluorescentes«
- Título de la tesis: Detección de hormonas esteroides y actividad de la proteasa ns3 del virus de la hepatitis c mediante indicadores fluorescentes
- Autor: Fernando Picazo Sanchez
- Universidad: Castilla-la mancha
- Fecha de lectura de la tesis: 05/07/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Llopis Borrás
- Tribunal
- Presidente del tribunal: federico Pallardo calatayud
- joaquín Jordán bueso (vocal)
- mario Duran prado (vocal)
- José Francisco Pertusa grau (vocal)