Tesis doctoral de Anna Ubach Font
Este trabajo presenta la producción recombinante de la hormona gonadotropina coriónica equina en la levadura metilotrófica pichia pastoris. se han rediseñado los dos genes que la codifican para mejorar su expresión. Una vez rediseñados se han sintetizado mediante la técnica de pcr y se han introducido en el vector de expresión ppiczalphaa, típico de pichia y para la expresión controlada por el promotor de la alcohol oxidasa (aox). se han obtenido 4 tipos distintos de cepas, unas que pueden expresar el gen alpha, otras el beta y las últimas el heterodímero, introduciendo los genes en los dos órdenes posibles. se ha analizado la capacidad productiva preliminar de estas cepas mediante cultivos en erlenmeyer. Seguidamente se han hecho cultivos en batch de 1 y 3l, así como en fed-batch de 3 y 5l. el caldo de cultivo se ha usado para implementar el proceso de purificación. Una purificación a partir de la cola de histidinas no ha sido posible y se ha sustituido por dos etapas de cromatografía, una de intercambio iónico y otra de gel-filtración. una vez obtenida la proteína recombinante purificada se ha procedido en una breve caracterización bioquímica, como son la determinación del peso molecular, punto isoeléctrico y el contenido en azúcares. Se ha comparado con la hormona nativa. También se ha analizado su actividad in vitro y in vivo, dando positiva la primera y negativa la segunda. Así pues, hace falta reformular la hormona para poder utilizarla en reproducción animal y que sea activa cuando se administra.
Datos académicos de la tesis doctoral «Producció recombinant de la gonadotrofina coriónica equina amb el llevat pichia pastoris.«
- Título de la tesis: Producció recombinant de la gonadotrofina coriónica equina amb el llevat pichia pastoris.
- Autor: Anna Ubach Font
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 23/09/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Francisco Valero Barranco
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ricardo De la fuente lópez
- alicia Serrano gonzález (vocal)
- (vocal)
- (vocal)