Tesis doctoral de Daniel Rodríguez Agudo
La tesis doctoral define 5 objetivos fundamentales: 1,- el estudio del posible papel del extremo carboxilo terminal de la histidina descarboxilasa (hdc) de mamíferos en la degradación dependiente de atp. 2,- el estudio de la posible degradación de la hdc por sistemas proteolíticos dependientes de calcio (calpaínas). 3,- el establecimiento de un protocolo de purificación de la enzima recombinante (residuos 1/512) en cantidades semi-preparativas. 4,- el estudio de los efectos inhibidores de algunos análogos de substrato, y finalmente. 5,- el estudio de la implicación de algunos residuos en la catálisis o estructura de la proteína mediante la estrategia de mutagénesis dirigida. los dos primeros objetivos se llevan a cabo a partir de distintas versiones recombinantes expresadas in vitro; cuya degradación se realiza, igualmente in vitro en sistemas enriquecidos en distintas proteasas o reconstituidos a partir de sus componentes. los otros tres objetivos tienen como material de trabajo preparaciones altamente purificadas de la enzima salvaje, o mutantes generados a partir de ella, que contienen 512 residuos del extremo n-terminal de la proteína deducida de su cdna. la caracterización de la versión salvaje y los efectos de inhibidores y mutaciones se estudian mediante espectrofotometría uv-vis, fluorescencia, electroforesis convencionales sds/page y no reductoras, transferencias western, y medidas de actividades enzimáticas en función de la capacidad de descarboxilación de histidina marcada radiactivamente. La discusión se apoya sobre un modelo 3d de la proteína generada mediante programas bioinformáticos de predicción de estructura de proteínas. las conclusiones de este trabajo se resumen en los siguientes puntos: 1,- el extremo carboxilo de la hdc no puede reemplazar al extremo carboxilo de la ornitina descarboxilasa en su papel en la degradación de esta proteína por el proteasoma 26s, por tanto,
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización de motivos estructurales implicados en la estabilización y la actividad de la histidina descarboxilasa de rata«
- Título de la tesis: Caracterización de motivos estructurales implicados en la estabilización y la actividad de la histidina descarboxilasa de rata
- Autor: Daniel Rodríguez Agudo
- Universidad: Málaga
- Fecha de lectura de la tesis: 31/01/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Francisca María Sanchez Jimenez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Juan Carbonell gisbert
- ignacio José Fajardo paredes (vocal)
- claudia Ruiz-capillas pérez (vocal)
- eugenio Gimenez gutierrez (vocal)