Tesis doctoral de Karol Diestra Villanueva
Resumen las betalactamasas de espectro extendido (blee) descritas frecuentemente en escherichiacoli, klebsiella pneumoniae y en menor medida en otras enterobacterias, confieren resistencia a cefalosporinas de espectro extendido (cefotaxima, ceftazidima y cefepima) y monobactámicos, y constituyen un grupo heterogéneo de enzimas. En un inicio, la descripción de blee abarcaba en su mayoría brotes hospitalarios que frecuentemente implicaban k. Pneumoniae y blee derivadas de shv-1 o de tem-1. En los últimos años se ha detectado el incremento de las blee de tipo ctx-m. Su difusión en bacterias de la misma o de diferente especie se ha asociado a ciertos elementos genéticos como las secuencias de inserción, los transposones y los plásmidos. Aunque con menor frecuencia, también se ha descrito la dispersión clonal de cepas productoras de este tipo de blee como por ejemplo las cepas productoras de ctx-m-15. el incremento en la preValencia de microorganismos con blee ha sido descrito por diferentes autores, tanto en el ámbito nacional como internacional. El sistema europeo de vigilancia de resistencias a antimicrobianos en patógenos invasores (earss) observó que la resistencia a cefalosporinas de tercera generación asociada a la producción de blee en e. Coli aumentó en casi todos los países europeos incluidos en el estudio; concretamente en españa aumentó del 1,6% al 4,1% en el periodo 2001-2003. Además, un estudio multicéntrico realizado en españa durante el año 2000 (proyecto geih-blee 2000) para determinar la preValencia de e. Coli y k. Pneumoniae portadores de blee en 40 hospitales españoles, constató que en e. Coli las blee ctx-m-9, ctx-m-14 y shv-12 constituían el 70% de las enzimas detectadas, en cambio, en k. Pneumoniae más del 50% fueron del tipo tem. en los últimos años, son muchos los hospitales españoles que han observado un cambio en la preValencia de las diferentes enzimas detectadas en e. Coli y k. Pneumoniae. Es por esto que en la red española para la investigación en patología infecciosa (reipi) se planteó la necesidad de realizar un estudio multicéntrico que ha permitido conocer y actualizar la evolución y el tipo de blee en e. Coli y k. Pneumoniae en diferentes hospitales de españa y descartar, mediante estudios moleculares, la posible expansión clonal de los microorganismos portadores de estas betalactamasas. así, el presente trabajo formó parte del proyecto nº 3 (estudio de la epidemiología clínica y molecular de enterobacterias productoras de betalactamasas de espectro extendido) de la reipi, en el cual participaron cuatro centros: el hospital ramón y cajal (hrc), el hospital universitario son dureta (sd), el centro nacional de microbiología (cnm) y el hospital de la santa creu i sant pau (hsp). Se estudiaron un total de 92 cepas de e. Coli y 32 de k. Pneumoniae aisladas en el primer trimestre del año 2004 en 11 hospitales españoles. la relación clonal entre las cepas se descartó mediante estudios de macrorestricción genómica con la enzima de baja frecuencia de corte xbai. Las blee se caracterizaron mediante isoelectroenfoque, pcr y secuenciación. En las cepas de e. Coli se observó una gran diversidad clonal en los patrones de restricción obtenidos por pfge, y un predominio de las betalactamasas ctx-m-14 (45,7%), ctx-m-9 (20,6%) y shv-12 (21,7%); en cambio, en las cepas de k. Pneumoniae se observó una menor diversidad clonal con un predominio de betalactamasas de tipo ctx-m (62,5%) que incluían ctx-m-1, ctx-m-9, ctx-m-14 y ctx-m-15. (Artículo i) posteriormente se estudiaron los entornos genéticos y perfiles plasmídicos de 58 cepas de e. Coli y k. Pneumoniae y se determinó el grupo de incompatibilidad de los plásmidos mediante rep typing-pcr, digestión con la enzima s1, campo pulsado, southern-blot e hibridación con sondas específicas para los diferentes grupos de incompatibilidad. Como resultado se observó una gran variabilidad de plásmidos que contienen genes blablee asociados a diferentes entornos genéticos. Los genes bla asociados a una mayor variabilidad plasmídica fueron los blactx-m-9, encontrándose asociados a plásmidos de los grupos inc i1, hi2, fib y k. Los genes de la blashv-12 se han encontrado en plásmidos de los grupos inc i1, fii, k y hi2. Por otro lado, blactx-m-14 se encontró sólo en plásmidos del grupo inc k. (artículo ii) finalmente, el centro nacional de microbiología procedió a realizar el estudio epidemiológico mediante multi locus sequence typing (mlst) y la determinación de los grupos filogenéticos de las cepas de e. Coli, con la finalidad de determinar la posible asociación entre los diferentes st, grupos filogenéticos y blee. Así, se observó una gran diversidad de tipos de st, siendo los más comunes el patrón st131 y los complejos st10 y st23, y además, las cepas de e. Coli que pertenecían al st131 fueron portadoras de una gran variedad de betalactamasas (ctx-m-15, ctx-m-9, ctx-m-10, ctx-m-14, shv-12 y ctx-m-1). Por lo que respecta a los grupos filogenéticos, se encontró que los complejos st10 y st23 estaban ligados al grupo filogenético a, mientras que el patrón st131 en su mayoría estaba ligado al grupo virulento extraintestinal b2. (Artículo iii) por lo tanto, en este estudio se observó una mayor diversidad de blee que en el estudio multicéntrico del año 2000, siendo estas blee vehiculadas por elementos genéticos como plásmidos y secuencias de inserción, ambos muy diversos dentro del grupo de cepas estudiadas. Por otro lado no se observó asociación entre los diferentes tipos de mlst, los grupos filogenéticos hallados y las blee que portaban las cepas de e. Coli.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización del entorno genético de genes blablee y plásmidos asociados en cepas circulantes de escherichia coli y klebsiella pneumoniae en españa.«
- Título de la tesis: Caracterización del entorno genético de genes blablee y plásmidos asociados en cepas circulantes de escherichia coli y klebsiella pneumoniae en españa.
- Autor: Karol Diestra Villanueva
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 29/10/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ferran Navarro Risueño
- Tribunal
- Presidente del tribunal: jordi Vila estape
- aurora Garcia fernandez (vocal)
- (vocal)
- (vocal)