Tesis doctoral de David González Fernández
Mediante mutagénesis con transposón se obtuvieron mutantes rugosos (r) de brucella melitensis 16m y h38. Los análisis electroforéticos y del ácido 3-deoxi-d-manno-2-octulosónico (kdo) y los «immunoblots» con anticuerpos monoclonales demostraron la falta de la cadena o (o-ps) en lso lipopolisacáridos (lps) de estos mutantes. la caracterización de las regiones mutadas confirmó el papel de varios genes wbk (wbka, gmd, per, wzm, weca) en la síntesis de la cadena o y permitió identificar tres genes nuevos en esta misma región que codifican, putativamente, una glicosil transferasa (wbke), la primasa que liga un aminoazúcar al bactoprenolpirofosfato (weca) y una epimerasa-deshidrogenasa (wbkd). Además, se identificó un nuevo gen (wbob) en la región wbo, también implicado en la síntesis de la cadena o. Dos genes más, wa**, manbnúcleo, se relacionaron con la síntesis del núcleo del lps y otro, pgm, con la de precursores. los mutantes en las orf bmeii0682, orf bmeii0053 y orf bmeii1134, presentaron fenotipo r, pero no se les pudo asignar un papel en la síntesis del lps. los perfiles electroforéticos y el contenido en kdo de los lpss fueron coherentes con los datos genómicos y permitieron clasificar los lps-r en tres tipos: r1, con el núcleo del lps aparentemente completo, y r2 y r3 con carencias progresivas en el mismo. El análisis con anticuerpos monoclonales demostró que el núcleo del lps de b.Melitensis es distinto del de b.Abortus. los mutantes r de b.Melitensis mostraron una superficie más hidrófoba que las cepas parentales, y también que mutantes homólogos r de b.Abortus. otras diferencias entre los mutantes r y las cepas parentales fueron su mayor sensibilidad a la penicilina y resistencia a la oxacilina, su marcada carga de superficie, su sensibilidad a la polimixina b y al fago r/c y la accesibilidad de proteínas de membrana externa a los anticuerpos. los mutantes r de b.Melitensis fueron más sensible
Datos académicos de la tesis doctoral «Análisis genético, inmunoquímico y biológico de mutantes rugosos de brucella melitensis«
- Título de la tesis: Análisis genético, inmunoquímico y biológico de mutantes rugosos de brucella melitensis
- Autor: David González Fernández
- Universidad: Navarra
- Fecha de lectura de la tesis: 19/12/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ignacio Moriyon Uria
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Juan evaristo Suarez fernandez
- Jesús Agí¼ero balbín (vocal)
- José María Blasco Martinez (vocal)
- marina García delgado (vocal)