Tesis doctoral de Lorea Manterola Kareaga
El análisis mediante 2-dge reveló que los mutantes en el sistema bvrr/bvrs no expresaban ciertas proteínas de membrana externa (omp) y expresaban otras no presentes en la cepa parental. Mediante western-blot con anticuerpos monoclonales se identificó que una de las proteínas ausentes en los mutantes era la omp25. La microsecuenciación de las proteínas extraídas de los geles de 2-dge mediante maldi-ms permitió identificar otra de las omps no descrita hasta la fecha, la omp22. El control de la expresión de la omp25 y omp22 por parte del sistema regulador de dos componentes tenía lugar a nivel transcripcional, ya que la actividad de los promotores p omp25 y p omp22 estaba reducida en los mutantes bvrr/bvrs. Se identificó el estrés nutricional como factor que modula la expresión de ambas omps. No fue posible identificar las omps cuya expresión parecía estar reprimida por el sistema bvrr/bvrs en condiciones de cultivo de laboratorio. A diferencia de lo que ocurría con los mutantes bvrr/bvrs, la mutación en las proteínas omp25 y omp22 no afectó a la sensibilidad a la polimixina b, a la sensibilidad a la acción bactericida del suero normal de vaca y humano, a la virulencia en el modelo de ratón, a la multiplicación intracelular en macrófagos y células hela, ni a la internalización en las células hela. Estos resultados indicaban que además de controlar la expresión de la omp25 y omp22, el sistema bvrr/bvrs debía regular otros factores implicados en la virulencia de brucella, por lo que se analizó la composición del lps. las técnicas empleadas, sds-page e inmunoblot con anticuerpos específicos, no permitieron detectar alteraciones en el núcleo de un doble mutante rugosos bvrr::tn5 aper. Sin embargo, se detectó un mayor grado de acilación del lípido a y una mayor fluidez de las cadenas acilo en el lps de los mutantes bvrr/bvrs. Por otro lado, el mutante bvrr pero no el bvrs presentó problemas de crecimiento en
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización del sistema regulador de dos componentes bvrr/bvrs de brucella abortus«
- Título de la tesis: Caracterización del sistema regulador de dos componentes bvrr/bvrs de brucella abortus
- Autor: Lorea Manterola Kareaga
- Universidad: Navarra
- Fecha de lectura de la tesis: 27/02/2004
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ignacio Lopez Goñi
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ignacio Moriyon uria
- Francisco Garcia del portillo (vocal)
- Juan SanJuan (vocal)
- iñigo Lasa (vocal)