Tesis doctoral de María Del Carmen Badia Picazo
Introducción: ser portador del alelo 4 de la apolipoproteína e (apoe) es el factor genético de riesgo para sufrir enfermedad de alzheimer (ea) más reconocido en la actualidad sin que se conozcan los mecanismos exactos que provocan dicha predisposición. objetivos: nuestro objetivo es conocer cómo influye el ser portador del alelo 4 de la apoe en sujetos jóvenes y sanos a nivel de funciones cognitivas, antecedentes patológicos, parámetros analíticos, estrés oxidativo y supervivencia celular, biomarcadores de inflamación y expresión de enzimas antioxidantes y relacionadas con la fosforilación de tau. materiales y métodos: reclutamos 54 sujetos con edades comprendidas entre 25-55 años, 33 de ellos hijos de pacientes con ea y genotipo apoe 4/4 y 21 controles equiparables en edad y sexo sin antecedentes familiares de ea. Se realiza una visita médica con recogida de antecedentes personales y patológicos. Para medir funciones cognitivas utilizamos el test de stroop y el test de memoria de rey. Se realiza una analítica completa, medición de glutatión basal por hplc, medición de glutatión tras incubación con el péptido beta-amiloide (aíY), apoptosis y activación de caspasas en linfocitos aislados tras incubación con aíY por microscopía confocal, genotipo apoe, expresión de genes de enzimas antioxidantes (superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa, catalasa y enzimas de síntesis de glutatión) y de genes de enzimas relacionadas con tau (rcan1, calcineurina, pkr, gsk3íY) mediante pcr en linfocitos aislados, cuantificación de enzimas relacionadas con tau (calcineurina, rcan1.4, gsk3íY) por electroforesis y western blotting, determinación de citocromo c, tnfalfa y colesterol oxidado mediante kits de elisa. Reclutamos también 11 sujetos con ea y apoe4 y 9 controles equiparables en edad y sexo en los cuales realizamos pcr de enzimas antioxidantes y relacionados con tau. Para el estudio estadístico se utilizó el paquete estadístico spss. resultados: nuestros grupos presentaron homogeneidad para las variables de edad, sexo y nivel educacional. A nivel cognitivo encontramos peores puntuaciones en los sujetos portadores del alelo 4 de la apoe en el test de stroop. En el subgrupo de sujetos universitarios también hallamos peores puntuaciones en nuestros casos en aprendizaje y memoria de retención. Existe un mayor porcentaje de quejas de memoria entre los casos así como mayor porcentaje de síndrome depresivo. Existe una mayor tendencia a la dislipemia en el grupo casos y menor cantidad de hdl-colesterol en las mujeres apoe4. Existe menor producción de tnfalfa tras estimulación antigénica en sangre de sujeto con genotipo apoe 4/4. A nivel de estrés oxidativo hallamos menor cantidad de glutatión oxidado en sangre basal en nuestros casos con menor oxidación de glutatión y menor apoptosis de linfocitos aislados tras incubación 24 horas. Encontramos mayor expresión de enzimas de síntesis de glutatión y glutatión peroxidasa así como de calcineurina, rcan1.4, gsk3íY y pkr en nuestros casos respecto a controles. En los sujetos con apoe4 y ea encontramos menor expresión de enzimas de síntesis de glutatión que en controles y sobreexpresión de rcan1.4 y calcineurina. No hemos encontrado toxicidad debida al péptido aíY en nuestras muestras. conclusiones: nuestros datos corroboran la hipótesis de que existe un fenotipo cognitivo asociado al alelo 4 de la apoe, así como una predisposición a la depresión y dislipemia. Hemos demostrado que los sujetos con genotipo apoe 4 presentan un patrón antioxidante diferente en sangre periférica, con mayores niveles de glutatión reducido en situación basal, presentando menor oxidación de glutatión en sangre periférica y menor apoptosis en linfocitos aislados tras agresiones apoptogénicas. Consideramos que existe una sobrecompensación de sistemas antioxidantes en los sujetos jóvenes con genotipo 4 de la apoe, lo cual hemos corroborado al encontrar una sobreexpresión de enzimas de síntesis de glutatión así como de calcineurina, pkr, gsk3íY y rcan 1.4. Existe un agotamiento de los mecanismos antioxidantes compensatorios en los sujetos con enfermedad de alzheimer y genotipo apoe 4, lo que se refleja en una menor expresión de enzimas de síntesis de glutatión. A nivel de enzimas relacionadas con la proteína tau y su fosforilización, encontramos un patrón similar de sobreexpresión en los sujetos con enfermedad de alzheimer y genotipo apoe 4 y los sujetos jóvenes con genotipo apoe 4, con sobreexpresión de arn de los enzimas rcan 1.4 y calcineurina. Conclusión final: ser portador del alelo 4 de la apoe es un factor de riesgo para desarrollar la ea, probablemente debido a una disminución de la función antioxidante de la apoe, lo cual conlleva a la sobreexpresión de otros sistemas antioxidantes que finalmente terminan por agotarse (como es el caso de los enzimas de síntesis de glutatión) o produciendo alteraciones celulares secundarias a su activación crónica (como es el caso de calcineurina, pkr, rcan 1.4 y gsk3íY) como son la muerte celular por apoptosis y la hiperfosforilación de la proteína tau.
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio de estrés oxidativo en hijos de pacientes con enfermedad de alzheimer portadores del alelo 4 de la apolipoproteína e«
- Título de la tesis: Estudio de estrés oxidativo en hijos de pacientes con enfermedad de alzheimer portadores del alelo 4 de la apolipoproteína e
- Autor: María Del Carmen Badia Picazo
- Universidad: Universitat de valéncia (estudi general)
- Fecha de lectura de la tesis: 05/02/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ana Lloret Alcañiz
- Tribunal
- Presidente del tribunal: josep Redon mas
- coral Sanfeliú pujol (vocal)
- jordi Perez tur (vocal)
- Juan José Zarranz imirizaldu (vocal)