Tesis doctoral de Javier Zarranz Ventura
El factor de crecimiento transformante beta (tgf-β) es un potente inductor de la angiogénesis a través de la hipersecreción de vegf. Dado que el vegf es el principal factor implicado en la neovascularización coroidea (nvc), un bloqueo selectivo del tgf-β puede modificar el desarrollo de estas lesiones afectando a diversas citoquinas implicadas en este proceso.Este trabajo pretende evaluar el efecto de la inhibición del tgf-β con dos péptidos denominados p17 y p144 en un modelo de nvc inducida por láser diodo (li-nvc) en ratas pigmentadas long evans. Estos péptidos han demostrado un fuerte efecto inhibitorio sobre el tgf-β y la angiogénesis tgf-β-dependiente en distintos modelos animales. Este efecto ha sido evaluado en 2 diseños experimentales, sobre la inducción de lesiones (48h post-laser) y sobre lesiones precoces de nvc (16 días post-laser). en el estudio sobre inducción de lesiones se incluyeron 61 ratas long evans a las que se les aplicó el modelo de li-nvc. 48 h despues se administraron los tratamientos. El grupo de control intravenoso y el grupo p17 intravenoso recibieron 5 dosis (0.2 ml cada 72 h) de vehículo y p17 (1 mg/ml) respectivamente. 4 grupos recibieron tratamiento intravítreo con p17 a baja (1 mg/ml) y alta dosis (20 mg/ml) y p144 a baja (1 mg/ml) y alta dosis (3 mg/ml), mientras el ojo contralateral fue inyectado con vehículo. Se realizó angiofluoresceingrafía (agf) de forma semanal durante 4 semanas. Tras el sacrificio, los niveles de proteína de vegf, tgf-β y pdgf se determinaron por elisa en homogeneizados de epr y retina. El área de difusión media medida en pixels fue significativamente menor a la 2ª y 4ª semana con el p17 intravenoso y desde la 2ª semana con el p17 intravítreo a dosis alta, mientras que el p144 mostró un área menor en todos los tiempos. El p17 intravítreo mostró menores niveles de tgf-β en retina y pdgf en epr a dosis baja, mientras que a dosis alta mostró niveles menores en vegf y tgf-β en retina y epr, así como pdgf en epr. El p144 mostró niveles menores de vegf en retina a dosis alta. en el estudio sobre lesiones precoces de nvc se incluyeron 71 ratas. 14 días tras el laser se realizó una agf control y 48 horas después se administraron los tratamientos. 3 grupos endovenosos y 3 grupos intravítreos fueron incluidos, control (vehículo), p17 (1 mg/ml) y p144 (1 mg/ml); y p17 (20 mg/ml), p144 (3 mg/ml) y mezcla de ambos péptidos p17 y p144 (20 mg/ml y 3 mg/ml). Se realizó agf semanal durante 4 semanas y se enuclearon los ojos para estudio bioquímico. Se determinó la expresión génica mediante pcr a tiempo real para los genes vegf, tgf-β, cox-2, igf-1, pai-1, il-6, mmp-2, mmp-9 y tnf-, los niveles de proteína de vegf y p-smad2 por western blot, y los niveles de actividad enzimática de mmp-2 mediante zimografía en gel de gelatina. Se observó disminución significativa en el área de difusión media desde la 3ª semana en los grupos p17 y p144 intravítreo, y desde la 2ª semana en el grupo de mezcla intravítrea. Los niveles de expresión génica fueron menores en los genes vegf y cox-2 en los grupos p17 y p144 endovenoso, vegf en el grupo de mezcla intravítrea y mmp-2 en los grupos p17 y p144 intravítreo. Los niveles de proteína de vegf fueron menores en los grupos p17 y p144 endovenosos e intravítreos, y los niveles de psmad2 fueron menores en los grupos p17 y p144 endovenosos y mezcla intravítrea. Los niveles de actividad de mmp-2 fueron significativamente menores para p17 y p144 endovenosos e intravítreos. los hallazgos descritos en esta tesis sugieren un efecto marcado de los péptidos p17 y p144 sobre el vegf mediante una vía alternativa a los tratamientos actuales. La inhibición adicional del tgf-β, pdgf, cox-2, mmp-2 y mmp-9 puede proporcionar un beneficio añadido a los fármacos anti-vegf disponibles en la actualidad. Este es el 1er estudio dirigido a evaluar el efecto antiangiogénico de estos péptidos en un modelo animal de nvc.
Datos académicos de la tesis doctoral «Efecto de la inhibición del tgf-beta en neovascularización coroidea inducida por láser diodo-péptidos p17 y p144«
- Título de la tesis: Efecto de la inhibición del tgf-beta en neovascularización coroidea inducida por láser diodo-péptidos p17 y p144
- Autor: Javier Zarranz Ventura
- Universidad: Navarra
- Fecha de lectura de la tesis: 16/12/2011
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Alfredo García Layana
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Piñero bustamante
- nicolas Cuenca navarro (vocal)
- angel Salinas alaman (vocal)
- adnan Tufail (vocal)