Tesis doctoral de Antonio Castro Castro
Nuestro objetivo principal era abordar una búsqueda genómica para identificar nuevas proteínas implicadas en el mecanismo de translocación de la gtpasa rac1 a la membrana plasmática. Para realizar el trabajo se eligió un método de screening por ganancia de función mediante el que se analizaron 135.000 clones de una genoteca de adnc humana en una línea celular reportera hek-293t que expresa de forma estable la versión silvestre de rac1 fusionada a la egfp. Gracias a esta biosonda fluorescente pudimos identificar y aislar aquellos clones cuya sobreexpresión promovía la translocación de egfp-rac1 a la membrana. Aislamos un total de 21 clones con capacidad translocadora. Puesto que estábamos interesados en descubrir nuevas proteínas directamente implicadas en el tráfico entre citosol y membrana decidimos centrar nuestro trabajo en cuatro proteínas: dos citosólicas (coronina-1a y wdr26) y dos transmembrana (basigina y tmem8a). la identificación de coronina-1a tras nuestro rastreo celómico nos sugirió que esta proteína, per se o de un modo concertado con el citoesqueleto de f-actina, podría estar regulando de forma activa la localización en membrana de la gtpasa rac1. La investigación de esta hipótesis nos llevó a descubrir un nuevo ciclo de retroalimentación positiva mediado por coronina-1a y el citoesqueleto de f-actina que contribuye a la amplificación de la fracción de rac1 activa y unido a la membrana durante procesos de señalización celular. En este circuito participan otros mediadores de señalización ya conocidos como arhgef7, pak1, rhogdi y probablemente wdr26. por otra parte, basigina y tmem8a inducen la translocación de rac1 (además de otras gtpasas como cdc42 y rhog) de una forma independiente de la ruta anteriormente descrita. Nuestros resultados apuntan a que estas proteínas transmembrana inducen la estabilización y agregación de balsas lipídicas en la superficie celular, lo cual supondría la acumulación de rac1 en la membrana.
Datos académicos de la tesis doctoral «Rastreo celómico mediante genotecas de expresión de reguladores de la gtpasa rac1«
- Título de la tesis: Rastreo celómico mediante genotecas de expresión de reguladores de la gtpasa rac1
- Autor: Antonio Castro Castro
- Universidad: Salamanca
- Fecha de lectura de la tesis: 23/07/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Xose Ramon Garcia Bustelo
- Tribunal
- Presidente del tribunal: joaquín Teixidó calvo
- alicia Garcia arroyo (vocal)
- neus Agell jane (vocal)
- pedro Fernández salguero (vocal)