Tesis doctoral de Eduardo Vidal Izquierdo
España es el principal productor de frutales de hueso y cítricos de la unión europea. Las enfermedades virales más importantes asociadas a estos cultivos son la sharka en frutales de hueso, causada por plum pox virus (ppv; potyvirus), y la tristeza de los cítricos, causada por citrus tristeza virus (ctv; closterovirus), ambas transmitidas mediante pulgones de forma no persistente y semipersistente, respectivamente. Actualmente existe un amplio conocimiento de la epidemiología de ambos virus en plantaciones adultas, sin embargo no existen estudios sobre su epidemiología en bloques vivero. Además, las características especiales de éstos, como un marco de plantación más reducido y la presencia de plantas con caracteres juveniles y con brotaciones suculentas, hace que el control de la dispersión natural de ambos virus sea más difícil. el objetivo principal de esta tesis doctoral fue el estudio de los distintos factores que determinan la epidemiología de ppv y de ctv en vivero, con el fin de establecer posibles estrategias de control. Además, considerando que toda estrategia de control requiere en algún momento de la aplicación de métodos de detección fiables, se han validado métodos serológicos y moleculares para una detección viral precoz y precisa de las plantas infectadas en vivero antes de la comercialización del material vegetal. se establecieron tres parcelas experimentales de vivero durante el año 2006 en diferentes localidades de la provincia de Valencia. Un vivero experimental se estableció en la localidad de llíria junto a una parcela de ciruelos japoneses con un 90% de incidencia de ppv y otro en carlet en una área con un 5% de incidencia de ppv. Además, se estableció una parcela experimental del patrón de cítricos citrus macrophylla en moncada en una zona con una incidencia del 85% de ctv. Las parcelas se muestrearon para conocer la incidencia viral en diferentes períodos y se analizaron mediante elisa-dasi y spot rt-pcr a tiempo real en el caso de ppv y mediante inmunoimpresión-elisa en el caso de ctv. los patrones de frutales de hueso más susceptibles a la infección natural por ppv en condiciones de alta densidad de inóculo fueron los ciruelos adesoto 101 y mariana gf8-1. Los patrones nemaguard y mirobolan 29c presentaron una susceptibilidad media, mientras los patrones cadaman y garnem resultaron resistentes a ppv-d detectándose únicamente el virus mediante rt-pcr a tiempo real. Sólo los patrones adesoto 101, mariana gf8-1 y nemaguard, resultaron infectados en la parcela sometida a baja presión de inóculo. Además, se confirmó la alta susceptibilidad a la infección natural a ctv del patrón c. Macrophylla. la dinámica poblacional de los pulgones se estableció con base en las capturas de trampas amarillas de moericke y plantas pegajosas. Tanto en los viveros de frutales de hueso como en la parcela de c. Macrophylla, mayo resultó el mes con mayor número de capturas. El número medio estimado de pulgones visitantes por planta en la parcela de llíria durante el mes de mayo de dos años consecutivos fue de 38,1, mientras en la parcela de carlet fue de 36,7. Mientras, en la parcela de c. Macrophylla el número de pulgones visitantes por planta durante el mes de mayo fue de 387,9. La especie predominante durante todo el año fue aphis spiraecola por ambos métodos de muestreo (más del 90% en trampas moericke y aproximadamente el 55% en plantas pegajosas), otras especies encontradas frecuentemente fueron a. Gossypii y hyalopterus pruni. El porcentaje de pulgones ppv-virulíferos, determinado por squash rt-pcr a tiempo real, que sobrevoló y/o aterrizaron sobre las plantas de vivero de frutales en una zona con una alta densidad de inóculo durante el mes de mayo (30,32%), fue más del triple que el determinado en una zona con una baja densidad de inóculo (7,98%). Se determinó que las visitas de los pulgones a las plantas de vivero y a las distintas especies de patrones de frutales se realizaron al azar. Además, no se han encontrado diferencias significativas en el número de pulgones ppv-virulíferos que visitaron las distintas especies de patrones de frutales ensayados en ambas parcelas. Se determinó la inexistencia de una relación directa entre el número de pulgones visitantes en una planta de vivero y su superficie foliar. El 17,50% de los individuos que aterrizaron en c. Macrophylla y/o sobrevolaron la parcela experimental resultaron ctv-virulíferos. en llíria, se utilizaron los patrones nemaguard y mariana gf8-1 para evaluar el efecto de la aplicación de aceites minerales en la incidencia viral. El tratamiento consistió en la aplicación de aceite mineral hortícola (sunspray ultrafine 85 % [ec] p/v) al 1% cada 10-12 días durante el primer año (2006), desde la brotación de las plantas hasta la caída de las hojas. Durante el segundo año (2007), los tratamientos se efectuaron con el mismo aceite cada siete días durante los meses de primavera de máximo vuelo de pulgones. En la parcela situada en carlet se evaluó el tratamiento con aceites minerales en los seis patrones de frutales de hueso. Los tratamientos no impidieron la presencia viral en los viveros experimentales, pero redujeron significativamente la incidencia de ppv en el patrón mariana gf8-1 en una zona con una alta presión de inóculo. La aplicación reiterada de aceites minerales no sólo no supuso un perjuicio para el desarrollo vegetativo de las plantas tratadas sino que puede sustituir a otros tratamientos fitosanitarios. En la parcela de c. Macrophylla el uso de aceite no supuso reducción de la incidencia de ctv. se validaron las técnicas spot y tissue-print rt-pcr a tiempo real, en comparación con elisa-dasi e inmunoimpresión-elisa, respectivamente, para su uso rutinario en detección. La coincidencia en resultados entre spot rt-pcr a tiempo real y elisa-dasi fue casi perfecta para detección de ppv y la coincidencia entre tissue-print rt-pcr a tiempo real e inmunoimpresión-elisa fue substancial para detección de ctv, según el índice kappa de cohen. Los diferentes parámetros de diagnóstico calculados indican que las técnicas moleculares presentaron mayor sensibilidad y por tanto son recomendables cuando se requiera una muy buena precisión en los individuos negativos (plantas madre, material base y plantas para exportación). Sin embargo, las técnicas serológicas utilizadas mostraron mayor especificidad y son recomendables para inspección rutinaria. La combinación de técnicas serológicas y moleculares es recomendable para una precisión casi total de los análisis. se ha demostrado como la técnica spot rt-pcr a tiempo real puede ser utilizada con éxito en muestras compuestas de hasta diez plantas sin perder precisión en detección de ppv en cualquier época del año. Por el contrario, la técnica elisa-dasi mostró diferencias significativas en la precisión de la detección según la época del año y el número de plantas analizadas, siendo las mejores épocas para la detección de ppv primavera y verano seguidos de otoño y no se aconseja el uso de mezclas compuestas en invierno. se han aplicado, por primera vez en fitopatología, modelos latentes para la estimación de los diferentes parámetros de diagnóstico de las técnicas spot rt-pcr a tiempo real y elisa-dasi. Se ha demostrado que éstos pueden ser aplicados en la estimación de los parámetros de diagnóstico de nuevas o ya validadas técnicas de detección de agentes fitopatógenos. como conclusión general, esta tesis doctoral aporta conocimientos básicos sobre la epidemiología de los virus de la sharka y de la tristeza en bloques de vivero, que podrán ser aplicados para el diseño de estrategias de control. Además, se sugiere el uso de métodos de control respetuosos con el medio ambiente, como son el empleo de patrones poco susceptibles o resistentes a ppv y el uso de aceites minerales con residuo cero. También se han validado las técnicas moleculares spot y tissue-print rt-pcr a tiempo real para la detección fiable y precisa de ppv y ctv en plantas de vivero. El uso de ambas técnicas ofrece una mayor garantía de la sanidad del material vegetal analizado que otras técnicas hasta ahora empleadas.
Datos académicos de la tesis doctoral «Epidemiología de plum pox virus y citrus tristeza virus en bloques de plantas de vivero. métodos de control«
- Título de la tesis: Epidemiología de plum pox virus y citrus tristeza virus en bloques de plantas de vivero. métodos de control
- Autor: Eduardo Vidal Izquierdo
- Universidad: Politécnica de Valencia
- Fecha de lectura de la tesis: 15/10/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María no J. Cambra álvarez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: alberto Fereres castiel
- paloma Abad campos (vocal)
- nieves Capote maínez (vocal)
- María Luisa Badenes catalá (vocal)