Tesis doctoral de Alejandro Atarés Huerta
El melón es una de las especies hortícolas más importantes en el mundo. en este trabajo pretendemos abordar el desarrollo de diversos métodos que permitan la transferencia de genes al acervo génico de melón mediante la transformación y fusión de protoplastos. en primer lugar, empleando el protocolo de aislamiento, cultivo y regeneración de plantas a partir de protoplastos de melón, desarrollado previamente en nuestro grupo, estudiamos dos vías para la selección de las células procedentes de protoplastos transformados o fusionados. Utilizamos cotiledones de ocho días con dos días de precultivo en medio nb 2,5/1,0 como fuente de protoplastos y comprobamos que las células regeneradas no podía seguir su crecimiento si se añadían 5 mg.L-1 de kanamicina desde el inicio del cultivo o 50 mg.L-1 de kanamicina en la fase de gelificación. En cambio, en la fase de minicallos, ni siquiera una concentración de 100 mg.L-1 de kanamicina era suficiente para inhibir el crecimiento. Por otra parte, vimos que la adición desde el inicio del cultivo de nacl 50 nm era suficiente para impedir el crecimiento de los protoplastos de melón. En cambio, cuando se aplicaba el mismo agente selectivo en la fase de gelificación, hacía falta un tratamiento con nacl 150 mm para detener el crecimiento, aunque a menores concentraciones también veíamos un claro efecto sobre el cultivo. conviene resaltar que se ha conseguido la trasformación estable de nuestro material, mediante dos métodos, la electroporación (transformación de protoplastos mediante el empelo de corrientes eléctricas) y la quimioporación (transformación de protoplastos mediante la adición de polietilenglicol). En el primer caso, hemos comprobado la importancia que tiene la adición de calcio en el medio de electroporación cuando ésta se lleva a cabo a temperatura ambiente. en ambos métodos, hemos constatado una mayor eficacia de transformación al utilizar una concentrac
Datos académicos de la tesis doctoral «Transferencia de genes a protoplastos de melón«
- Título de la tesis: Transferencia de genes a protoplastos de melón
- Autor: Alejandro Atarés Huerta
- Universidad: Politécnica de Valencia
- Fecha de lectura de la tesis: 27/02/2004
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Vicente Moreno Moreno
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Luis Navarro lucas
- María Luisa Gomez guillamon arrabal (vocal)
- Luis Miguel Martín martín (vocal)
- Valles brau m. pilar (vocal)