Tesis doctoral de Assia Bentebibel
La carnitina palmitoiltransferasada 1 (cpt1) es un enzima que facilita el transporte de ácidos grasos de cadena larga a la matriz mitocondrial, donde serán oxidados. Este proceso esta regulado por malonil-coa, el inhibidor fisiológico de cpt1. El objetivo de este trabajo es identificar mediante análisis bioinformáticas y cinéticos la ubicación del malonil-coa en las isoformas hepática y muscular de cpt1 (cpt1a y cpt1b). Con un buen modelo malonil-coa/cpt1 se podrían diseñar fármacos para regular la íY-oxidación de algunos ácidos grasos como palmito y oleado, ya que sus niveles están estrechamente relacionados con patologías como la obesidad y la diabetes tipo 2. aún no se ha resuelto el cristal de cpt1, posiblemente por ser una proteína integral de membrana. Por ellos hemos recurrido a una aproximación bioinformática y análisis de «docking» in silico, como método predictivo de las posibles interacciones de malonil-coa con cpt1. El modelo 3d obtenido presenta dos sitios de unión de malonil-coa, situados de forma opuesta en el canal catalítico, sitio a y sitio o. La validez de este modelo de «docking» ha sido confirmada mediante estudio cinético de competición del inhibidor con los sustrastos de cpt1a, carnitina y palmitoil-coa y también mediante análisis de mutantes de cpt1a. Malonil-coa es un inhibidor competitivo de cpt1 respecto al sustrato palmitoil-coa y es un inhibidor mixto lineal de cpt1a respecto a la carnitina. Estos datos están de acuerdo con el modelo 3d propuesto de interración de malonil-coa, carnitina y palmitoil-coa. en este trabajo proponemos por vez primera un modelo 3d de la isoforma muscular, cpt1b que ha resultado muy similar, como era de esperar, al de la isoforma hepática. Mediante estudios de mutagénesis dirigida hemos confirmado la ubicación de los residuos catalíticos y de un residuo implicado en la sensibilidad a malonil-coa. diversos estudios presentan al enzima cpt1 como potencial diana para el tratamiento de la obesidad y la diabetes tipo 2. También el enzima ácido graso sintasa (fas) se ha propuesto como diana para el tratamiento de la obesidad. En este trabajo hemos demostrados que c75, una lactona ciclica de origen sintético, no solo actúa sobre fas sino también sobre cpt1 y hemos aportado nueva información sobre el mecanismo de acción de esta molécula sobre la actividad cpt1 in vitro en in vivo. Los análisis por maldi-tof y hplc-ms/ms y los estudios cinéticos y estructurales confirman que c75 es transformado in vitro e in vivo en su derivado coa, el c75-coa y bajo esta forma actúa como un inhibidor potente y reversible de cpt1. Además c75-coa es un inhibidor competitivo respecto al sustrato palmitoil-coa y es un inhibidor competitivo mixto respecto al sustrato carnitina. Los resultados del análisis de docking de una molécula de c75-coa en cpt1a confirmación los resultados cinéticos obtenidos. Este estudio abre las puertas para el diseño de nuevos fármacos basados en la molécula de c75.
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio de los mecanismos de inhibición de la actividad carnitina palmitoil transferasa 1«
- Título de la tesis: Estudio de los mecanismos de inhibición de la actividad carnitina palmitoil transferasa 1
- Autor: Assia Bentebibel
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 12/02/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Fausto Garcia Hegardt
- Tribunal
- Presidente del tribunal: laura Baldoma llavines
- eduardo Lopez viñas (vocal)
- (vocal)
- (vocal)