Tesis doctoral de Alicia Mancha De Llanos
El término «pteridina» se propuso para denominar a una serie de anillos pirazino [2,3-d] pirimidino, que se encuentran en un amplio rango de sistemas vivos y participan en funciones biológicas relevantes. Estos analitos de interés incluyen derivados pteridínicos (sustituyentes 2-amino-4-hidroxi) y lumazínicos (sustituyentes 2,4-dihidroxi). el 5,6,7,8-tetrahidrobiopterin (bh4) es la pteridina no-conjugada más importante en los seres humanos, está involucrado en reacciones de hidroxilación de fenilalanina, tirosina y triptófano como cofactor de la fenilalanina hidroxilasa (pah), reduciendo el oxígeno molecular, generando electrones y tranformándose en 7,8-dihidrobiopterin (bh2), el cuál regenera bh4 por acción de la enzima dihidropteridina reductasa (dhpr). Los principales metabolitos del bh4 son diferentes pteridinas no conjugadas como neopterin (neo), biopterin (bio) que es una forma oxidada del bh4, isoxantopterin (iso) y pterin (pt). las alteraciones en el mecanismo del metabolismo de bh4 dan lugar a diferentes patologías, especialmente importantes en el control de la salud de los niños. Por ejemplo, el déficid de pah produce la «fenilcetonuria» (pku). Por otro lado, cuando existe déficit de bh4 (o bien porque la enzima guanosina trifosfato (gtp) no haya producido el suficiente bh4 o bien porque el bh2 no recircule a bh4) se produce la «hiperfenilalaninemia». Las manifestaciones clínicas de ambas enfermedades son similares y dan lugar al retraso mental. es muy importante ver la relación entre neo/bio en orina, así como el contenido de fenilalanina, tirosina, la actividad enzimática y otras pteridinas con objeto de hacer un diagnóstico diferencial de las hiperfenilalaninemias. por ello, a lo largo de esta memoria de investigación: – se determinan pteridinas marcadoras en fluidos biológicos, tales como suero y orina, mediante la técnica de cromatografía líquida de alta resolución (hplc) – se optimizan métodos de elevada sensibilidad, rápidos y sencillos – se estudia la posibilidad de acoplamiento on-line de sistemas de fotoderivatización para generar derivados moleculares altamente fluorescentes – se utilizaron métodos de calibración multivariante de segundo orden, para analizar matrices de datos de segundo orden obtenidas a partir de intensidad de fluorescencia-longitud de onda de emisión-tiempo de retención. con todo ello se estudió el efecto que ejerce la presencia de agentes oxidantes y la radiación sobre disoluciones acuosas de dihidro- y tetrahidropteridinas, con bajo rendimiento cuántico de fluorescencia; favoreciendo ambos efectos la formación de productos con un elevado rendimiento cuántico de fluorescencia. Además, mediante irradiación uv y posterior seguimiento cromatográfico, se establece la posibilidad de generar bio a partir de disoluciones ligeramente ácidas de bh4 y bh2. se propone un método que permite la determinación simultánea de pteridinas marcadoras y los cofactores bh4 y bh2, mediante un sistema cromatográfico acoplado con un fotorreactor post-columna, usando detección fotométrica de diodos y fluorimétrica de barrido rápido, en línea. se lleva a cabo un estudio comparativo para establecer el efecto que ejercen las condiciones de oxidación previas de las muestras de orina, sobre los resultados obtenidos en el análisis de once pteridinas. Se ha establecido un método cromatográfico usando detectores en serie para muestras de orina que han sido oxidadas previamente por dos métodos: usando medio básico con yodo/yoduro y neutro con permanganato de potasio. se utilizó un tratamiento quimiométrico de las señales de segundo orden intensidad de fluorescencia-longitud de onda de emisión-tiempo de retención, con objeto de establecer un método rápido para determinar cromatográficamente neo, xan, bio iso y pt, consideradas como las pteridinas marcadoras básicas. El algoritmo mcr-als permitió la determinación de dichas pteridinas, en muestras de orina, en presencia de interferencias de la matriz no modeladas.
Datos académicos de la tesis doctoral «Nuevas estrategias analíticas para la determinación de pteridinas biomarcadoras en fluidos biológicos, mediante métodos separativos y quimiométricos«
- Título de la tesis: Nuevas estrategias analíticas para la determinación de pteridinas biomarcadoras en fluidos biológicos, mediante métodos separativos y quimiométricos
- Autor: Alicia Mancha De Llanos
- Universidad: Extremadura
- Fecha de lectura de la tesis: 14/10/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Anunciación Espinosa Mansilla
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Francisco Salinas lópez
- José Luis Pérez pavón (vocal)
- isabel Durán martín-merás (vocal)
- Juan José Berzas nevado (vocal)