Tesis doctoral de Xabier Arias Moreno
En el presente trabajo se ha realizado una completa caracterización biofísica del módulo 5 del receptor de ldl (lr5). Lo primero que se realizó una vez puesto a punto el protocolo de purificación, fue el estudio de la conectividad de sus puentes disulfuro. Esta verificación se antoja fundamental, ya que la funcionalidad de lr5, y de todo el receptor de ldl, está estrechamente asociada a la presencia del complejo lr5-calcio. La formación de este complejo sólo es posible si los tres puentes disulfuro adquieren la correcta conectividad. Seguidamente, se procedió a la caracterización de su estabilidad conformacional a ph extracelular (ph 7.0) y a ph endosomal (ph 5.5) así como a la caracterización de su unión al calcio y al magnesio a estos dos phs. Los resultados obtenidos en estos experimentos nos han hecho proponer un nuevo modelo que trata de explicar la liberación de las lipoproteínas en el endosoma y el reciclaje del receptor. Paralelamente, se estudió la funcionalidad de lr5 mediante ciertos péptidos sintéticos con secuencias de las apolipoproteínas b y e, los cuales son considerados los ligandos naturales del receptor de ldl. Estos resultados nos han permitido determinar el sitio de unión a lipoproteína en lr5 y nos han demostrado que tanto el sitio a como el sitio b, pertenecientes a la apolipoproteína b, son capaces de unir lr5 in vitro. Por último, se diseñaron múltiples mutantes de lr5 causantes de hipercolesterolemia familiar. Tras lograr su expresión y purificación se realizó una completa caracterización de su replegamiento oxidativo y de su desplegamiento reductivo. Estos experimentos nos han permitido describir una compleja ruta de replegamiento tanto para la proteína silvestre como para los mutantes mencionados. En todos los mutantes pudimos comprobar una gran acumulación de un intermediario no funcional que curiosamente también se acumuló, en gran cantidad, en la ruta de replegamiento de la proteína silvestre en ausencia de calcio.
Datos académicos de la tesis doctoral «El módulo 5 del receptor de lipoproteínas de baja densidad. implicaciones mecanísticas de su estabilidad, plegamiento e interacciones moleculares.«
- Título de la tesis: El módulo 5 del receptor de lipoproteínas de baja densidad. implicaciones mecanísticas de su estabilidad, plegamiento e interacciones moleculares.
- Autor: Xabier Arias Moreno
- Universidad: Zaragoza
- Fecha de lectura de la tesis: 15/07/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Javier Sancho Sanz
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Miguel Pocovi mieras
- salvador Ventura zamora (vocal)
- óscar Millet aguilar-galindo (vocal)
- José Luis Sánchez quesada (vocal)