Tesis doctoral de Isabel Fuentes Calvo
La fibrosis podría definirse como un cicatrización anormal de los tejidos debida a un exceso en la acumulación de matriz extracelular (mec). El principal tipo celular que media en la fibrosis es el miofibroblasto. El factor de crecimiento transformante (tgf-beta 1) tiene un papel relevante en el origen y el mantenimiento de la fibrosis renal y además puede activar a la gtpasa ras. Hay tres isoformas de ras: h-, n- y k-ras. Experimentos previos muestran que en fibroblastos dobles knock-out (ko) de h-ras y n-ras había una mayor acumulación de mec y las rutas de erk y akt mediaban en este proceso. Nuestro objetivo ha sido estudiar el papel individual de h- y n-ras en la síntesis de mec, proliferación y migración. hemos analizado la síntesis de mec (evaluando la expresión de fibronectina y colágeno tipo i por western-blot, así como la síntesis de colágeno total mediante la medida de incorporación de [3h]-prolina a estas proteínas), la proliferación celular ( valorada por la tinción de núcleos con cristal violeta e inmunofluorescencia de ki67) y la migración de los fibroblastos (analizada mediante ensayos de cicatrización in vitro y migración en transwell) en fibroblastos obtenidos de embriones de ratones ko de las isoformas h-ras (h-ras-/-) o de n-ras (n-ras-/-). la expresión de fibronectina y colágeno tipo i, así como la síntesis de colágeno total fue notablemente mayor en los fibroblastos n-ras-/- y en h-ras-/- que en los fibroblastos controles, tanto en condiciones basales como tras el tratamiento con tgf-beta 1. La activación de ras total fue mayor sólo en fibroblastos ko de n-ras que en controles o que en ko de h-ras. La proliferación inducida por tgf-beta 1 se reduce significativamente en ausencia de n- o h-ras. La expresión de fosfo-erk y fosfo-akt fue mayor en fibroblastos h-ras-/- y en n-ras-/-; la movilidad de las células n-ras-/- o h-ras-/- se reduce en comparación con los fibroblastos wt. La inhibición de fosfo-akt con ly294002 reduce la expresión de proteínas de mec, la proliferación de fibroblastos y la migración tanto en fibroblastos wt como en h-ras-/- o n-ras-/-; la inhibición de fosfo- erk con uo126 redujo la proliferación sólo en fibroblastos h-ras-/-, y tuvo menos efecto sobre la síntesis de mec en fibroblastos h-ras-/- y n-ras-/- . en conclusión, nuestros datos sugieren que tanto la isoforma h- como n-ras tienen un papel relevante en las enfermedades con procesos fibróticos. Están implicadas en la regulación de la síntesis de mec, proliferación y migración en fibroblastos a través de erk and akt.
Datos académicos de la tesis doctoral «Modulación por las isoformas de ras de la síntesis de matriz extracelular y proliferación en fibroblastos«
- Título de la tesis: Modulación por las isoformas de ras de la síntesis de matriz extracelular y proliferación en fibroblastos
- Autor: Isabel Fuentes Calvo
- Universidad: Salamanca
- Fecha de lectura de la tesis: 01/06/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Carlos Martínez Salgado
- Tribunal
- Presidente del tribunal: María Jesús Monte rio
- Mª piedad Ruíz torres (vocal)
- José Manuel Valdivieso revilla (vocal)
- octavio Alda torrubia (vocal)