Tesis doctoral de Antonio Checa Gómez
La terapia antirretroviral ha mejorado sustancialmente tanto la duración como la calidad de vida de las personas infectadas por el virus de la inmunodeficiencia humana (vih). Durante los últimos 25 años, el estudio del mecanismo de infección del virus, ha conducido a la aparición de fármacos clasificados en familias dependiendo de la etapa de infección sobre la que actúan. la caracterización de estos analitos y la determinación de sus concentraciones en diversas matrices, especialmente en plasma, permite optimizar el tratamiento recibido por los pacientes. Si los niveles en sangre son demasiado altos existe el riesgo de peligrosos efectos secundarios. Si por el contrario estos no llegan a las concentraciones requeridas, la efectividad frente al virus disminuye y aumenta la probabilidad del desarrollo de resistencias ante los fármacos. Para su monitorización terapéutica, dado el elevado número de determinaciones a realizar, se requieren metodologías analíticas que permitan determinar estas concentraciones de una forma rápida, sencilla y lo más barata posible. en la presente memoria se presentan, en dos bloques, diferentes metodologías para el control de las concentraciones en diferentes matrices de este tipo de compuestos. el primer conjunto de métodos está basado en análisis por inyección en flujo (fia). Debido a la complejidad de las matrices, habitualmente se requiere un tratamiento previo de la muestra y una posterior separación de los compuestos antes de proceder a su determinación. En los procedimientos fia aquí descritos, las medidas instrumentales se realizan con un detector de diodos en serie para obtener las señales sin previa separación de los analitos, disminuyendo así el tiempo de análisis a dos o tres minutos. Para el cálculo de las concentraciones, los datos generados se tratan mediante resolución multivariante de curvas basada en mínimos cuadrados alternos (mcr-als) y regresión por mínimos cuadrados parciales (pls). De esta manera se han podido cuantificar diversos inhibidores de la transcriptasa inversa en disoluciones acuosas, y muestras biológicas de plasma y orina. para las matrices biológicas, los límites detección alcanzados han sido elevados y, por ello, se presentan un segundo bloque metodologías basadas en cromatografía de líquidos con detección espectrofotométrica ultravioleta (uv) o acoplada a espectrometría de masas (ms) y masas en tándem (ms/ms). el primero de estos métodos cromatográficos consiste en la separación y determinación de los fármacos de los inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleósidos (nrti), no análogos de nucleósidos (nnrti) y de la proteasa (pi), utilizando un tratamiento de muestra basado en extracción en fase sólida empleando detección uv. El tiempo de análisis es de 20 minutos, inferior a los tiempos presentados en otros estudios anteriores. los tiempos de análisis mejoran con las metodologías que utilizan detección ms y ms/ms. En este apartado, se presentan los trabajos realizados para la determinación simultánea de nrtis, nnrtis y pis, así como una metodología rápida para la determinación de nnrtis y pis en suero, que se aplica en la monitorización terapéutica de los niveles sanguíneos de estos fármacos en pacientes enfermos. como trabajo adicional, se presenta una revisión bibliográfica en la que se recogen los trabajos publicados en este campo durante los últimos cinco años. aids therapy has substantially improved both life expectancy and quality of people infected by human inmunodeficience virus (hiv). Over the last 25 years, the study of the virus mechanisms of infection has led to the appearance of drugs, divided into families depending on the stage of viral infection that they act on. the characterization of these drugs and the determination of their concentrations, specially in plasma, allows the optimization of the medical treatment received by the patients. When blood levels are too high, dangerous side effects may appear. On the contrary, if these levels do not reach a minimum amount, the effectiveness of the drug is compromised and the probability of developing resistance is increased. Because of the large number of measures required in clinical analysis, new analytical methods that allow drug quantification in a fast, simple and inexpensive way are needed. in this doctoral thesis, different methodologies to quantify these compounds in biological matrices are presented in two chapters. a first group of methods is based on flow injection analysis (fia). Due to the matrix complexity, sample pretreatment and compound separation prior to drug determination is often necessary. Fia methods here presented take advantage of data generated using a diode array detection so sample separation is not required and overall analysis time is decreased to 2 or 3 min. For concentration calculations, data generated is treated using multivariate curve resolution based on alternated least squares (mcr-als) and partial least squares regression (pls). This way allows drug quantification of different reverse transcriptase inhibitors in synthetic mixtures and biological samples such as plasma and urine. limits of detection reached in these biological matrices were high and, thus, a second group of methodologies based on liquid chromatography (lc) with ultraviolet (uv) mass spectrometry (ms) and tandem mass spectrometry (ms/ms) detection have been developed. the hplc-uv method allows the separation and quantification of drugs belonging to the nucleoside transcriptase reverse inhibitors (nrti), non nucleoside reverse transcriptase inhibitors (nnrti) and protease inhibitors (pi) families using sample solid phase extraction as a sample pretreatment. Total analysis time is 20 min. This is shorter than times presented in previous hplc-uv studies published in the literature. the analysis time improved when ms and ms/ms detection are used. In the section of hplc-ms(/ms) section, works for simultaneous determination of nrti, nnrti and pi drugs are described. A fast hplc-ms/ms method for the simultaneous determination of nnrti and pi drugs in serum, which is applied in therapeutic drug monitoring, is also presented. as an additional work, a review dealing with works published during the last five years is presented.
Datos académicos de la tesis doctoral «Desarrollo de métodos cromatográficos y de análisis por inyección en flujo para la caracterización y determinación de fármacos antirretrovirales«
- Título de la tesis: Desarrollo de métodos cromatográficos y de análisis por inyección en flujo para la caracterización y determinación de fármacos antirretrovirales
- Autor: Antonio Checa Gómez
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 16/12/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Santiago Hernández Cassou
- Tribunal
- Presidente del tribunal: miquel Esteban cortada
- ludovic Duponchel (vocal)
- (vocal)
- (vocal)