Tesis doctoral de Juan Manuel Falcon Perez
La proteína vacuolar ycf1p (yeast cadmium factor) está implicada en la resistencia a cd2+ y a otras sustancias tóxicas que son conjutadas con glutation en saccharomyces cerevisiae. Pertenece a la familia de transportadores abc (atp binding cassette) que incluye proteínas humanas como cftr (cystic fibrosis conductance transmembrane regulator) y mrp1 (multidrug resistance-associated protein). el objetivo de este trabajo ha sido profundizar en el estudio de las relaciones estructurales y funcionales de la proteína ycf1p. en una primera aproximación se crearon mediante mutagénesis dirigida veintidós mutaciones únicas en residuos conservados de los dominios de unión a nucleótidos (nbd1 y nbd2), transmembrana (tmd2) y regulador (r) de la proteína. la caracterización de los mutantes ha llevado a la identificación de residuos esenciales para la biogénesis (ile711, leu712, phe713, glu927 y gly1413), para la función (gly663, gly756, asp777, gly1306 y gly1311) y para la regulación (ile840, tyr855, ala910 y arg1143) de ycf1p. Una segunda aproximación ha consistido en el análisis de supresión intragénica de cinco mutaciones localizadas en los dominios nbd1 (g663v, g756d y d777n) o nbd2 (g1306e y g1311r) e implicadas en la unión y/o hidrólisis de atp. Todos los revertientes de los mutantes g663v, g756d, g1306e y g1311r resultaron ser reversiones de la mutación primaria a la secuencia silvestre. en cambio se han aislado trece mutaciones supresoras de la mutación d777n localizadas en los dominios: tmd1 (v5431i y f565l), tmd2 (a1003v, a1021t, a1021v, n1027d, q1107r, g1207d, s1212l y w1225c), nbd1 (s674l) y nbd2 (r1415g). Esta localización demuestra la interacción física y/o funcional de nbd1 con los otros tres dominios.La caracterización de los mutantes supresores indica que el mecanismo de supresión implica una alteración en la especificidad de sustrato.
Datos académicos de la tesis doctoral «Análisis de dominios funcionales del transportador abc, ycf1p, mediante supresión intragenica y mutagenesis dirigida.«
- Título de la tesis: Análisis de dominios funcionales del transportador abc, ycf1p, mediante supresión intragenica y mutagenesis dirigida.
- Autor: Juan Manuel Falcon Perez
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 30/11/1999
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Pilar Eraso Mazmela
- Tribunal
- Presidente del tribunal: alonso Rodriguez navarro
- Juan José Aragón reyes (vocal)
- Jesús Solera García (vocal)
- Juan a María Sempere condere (vocal)