Tesis doctoral de Figueroa García Francisco Javier
El objetivo principal de este trabajo era profundizar en la función que desempeña el antígeno centromérico humano cenp-a, en el papel general del centrómero. Para ello se plantearon cinco objetivos puntuales a desarrollar: 1,- generar anticuerpos monoespecíficos contra el antígeno centromérico humano cenp-a para su uso posterior en ensayos tanto in vivo como in vitro. 2,- ensayos del papel de la proteína centromérica cenp-a durante distintas fases del ciclo celular mediante el análisis por microinyección celular de los anticuerpos específicos anti-cenp-a generados. 3,- establecer un protocolo inicial de purificación del autoantígeno humano cenp-a a partir de células y/o tejidos humanos, para su empleo en ensayos funcionales. 4,- realizar ensayos de inmunoprecipitación de cromatina a partir de extractos nucleares humanos y analizar los componentes (ácidos nucleicos y proteínas) centroméricos coinmunoprecipitados con cenp-a. 5,- aislar, clonar y caracterizar el gen del autoantígeno cenp-a en el genoma de hámster, y comparar la homología con el de otras especies ya descritas. se ha generado un anticuerpo específico frente a un péptido de la región aminoterminal de la proteína humana cenp-a. Dicho anticuerpo ha sido purificado en una columna de afinidad y posteriormente utilizado en ensayos de microinyección en células humanas (hela), los cuales han revelado el papel esencial de cenp-a para la formación del cinetocoro y la división de la célula. posteriormente se ha establecido un protocolo de purificación de la proteína nativa a partir de extractos de placenta humana, mediante solubilización de cromatina, cromatografía de intercambio iónico y de afinidad. asimismo, se ha llevado a cabo la inmunoprecipitación de complejos de cromatina centromérica con el mismo anticuerpo generado anteriormente. el análisis mediante secuenciación de los adn inmunoprecipitados ha revelado que no presenta
Datos académicos de la tesis doctoral «Análisis funcional del autoantígeno cenp-a en la organización estructural del centrómero de mamíferos«
- Título de la tesis: Análisis funcional del autoantígeno cenp-a en la organización estructural del centrómero de mamíferos
- Autor: Figueroa García Francisco Javier
- Universidad: Cádiz
- Fecha de lectura de la tesis: 09/01/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Martinez Valdivia Manuel J.
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jesús Avila de grado
- Juan Jiménez martínez (vocal)
- alfredo Villasante atienza (vocal)
- marina García delgado (vocal)