Tesis doctoral de Ataya Ataya Farid Shokry
En chlamydomonas reinhardtii se encontró y purificó una proteína portadora de cofactor de molibdeno (mococp). Esta proteína funciona como donadora de cofactor de molibdeno (moco) a la aponitrato reductasa (witte et al., 1998). Se ha microsecuenciado esta proteína y se han diseñado oligonucleótidos degenerados que se han usado como cebadores para amplificar mediante pcr el gen que codifica para la mococp. Se ha aislado un clon de 1 kb correspondiente a la mococp y se ha estudiado la secuencia de este cdna. El análisis de esta secuencia, mediante el programa gcg, mostró una región traducida correspondiente a una proteína de 165 aminoácidos con una masa molecular de 16,5 kda y punto isoeléctrico de 6,1. Asimismo, se ha aislado el gen que codifica para la mococp (crmcp1) y corresponde a un dna de 2,5 kb cuya fase abierta de lectura contiene 4 exones y 3 intrones. El promotor de crmcp1 contiene muchas cajas posibles de regulación por luz (10) semejantes a diversas secuencias encontradas en promotores de genes de plantas, dos cajas de choque térmico y dos de control por nitrato. La mococp se ha clonado en el vector de expresión pgex-kg y se ha expresado como proteína de fusión (glutatión transferasa-mococp) en e.Coli. Esta proteína se ha purificado mediante cromatografía de afinidad (glutatión agarosa) hasta homogeneidad electroforética, de la que se liberó la mococp por digestión con trombina y se separó por cromatografía en la misma columna. La funcionalidad de esta proteína recombinante se ha demostrado mediante su capacidad de unión al moco libre (procedente la xantina oxidasa). Un estudio a nivel bioquímico sobre la mococp recombinante indicó que ésta se ensambla en forma de heterómero y no une moco bacteriano aunque puede unirse con alta afinidad al moco extraído de xo de leche y complementar la actividad de la aponr del mutante nit-1 del hongo n.Crassa. La mococp recombinante protege al moco unido frente a
Datos académicos de la tesis doctoral «Análisis molecular de la proteína portadora del cofactor de molibdeno de chlamydomonas reinhardtii«
- Título de la tesis: Análisis molecular de la proteína portadora del cofactor de molibdeno de chlamydomonas reinhardtii
- Autor: Ataya Ataya Farid Shokry
- Universidad: Córdoba
- Fecha de lectura de la tesis: 21/12/2001
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Emilio Fernandez Reyes
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Francisco Castillo rodriguez
- José María Vega piqueres (vocal)
- José Antonio Barcena ruiz (vocal)
- Antonio José Márquez cabeza (vocal)