Tesis doctoral de Marta Llarena Fernández
En cianobacterias el nitrato/nitrito se transportan al inferior celular mediante un transportador «atp-binding cassette» (abc) denominado nrt, compuesto por cuatro subunidades proteicas: nrta (subunidad periplásmica responsable de la unión del nitrato/nitrito), nrtb (subunidad transmembranal), nrtc y nrtd (subunidades de unión a nucleótido). En la cianobacteria filamentosa, termófila y no fijadora de nitrógeno, phormidium laminosum se habían identificado los genes nrta, nrtb y nrtc, que codifican el transportador abc de nitrato/nitrito, formado parte del operón nir, junto con el gen mira, que codifica la nitrito reductasa. en este trabajo se ha identificado el gen nrtd, a continuación de mrtc, formando parte del operón nir. La subunidad nrtc del transportador de nitrato/nitrito de p.Laminosum se ha purificado a partir de células deficientes en nitrógeno y se ha comprobado que hidroliza atp in vitro, en ausencia del resto de componentes del transportador. Los genes nrtc y nrtd se han clonado en plásmidos de expresión pqe-9 y se han expresado en e.Coli, purificándose como proteínas de fusión a cola de histidinas. Se han caracterizado las subunidades his6nrtc e his6nrtd por su capacidad para catalizar la hidrólisis de atp, con respecto a su especificidad por varios sustratos y sensibilidad a inhibidores, demostrándose la que ambas proteínas hidrolizan atp in vitro. además, mediante elctroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones no desnaturalizantes se ha detectado la formación de homodímeros de nrtc, his6nrtc e his6nrtd. La formación de homodímeros de his6nrtd también se ha comprobado por espectrometría de masas maldi-tof.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización de las subunidades de unión a nucleótido del transportador abc de nitrato/nitrito de la cianobacteria phormidium laminosum«
- Título de la tesis: Caracterización de las subunidades de unión a nucleótido del transportador abc de nitrato/nitrito de la cianobacteria phormidium laminosum
- Autor: Marta Llarena Fernández
- Universidad: País vasco/euskal herriko unibertsitatea
- Fecha de lectura de la tesis: 02/06/2005
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Luis Serra Ferrer
- Tribunal
- Presidente del tribunal: José María Vega piqueres
- Francisco Javier Florencio bellido (vocal)
- Emilio Fernandez reyes (vocal)
- María José Bonete pérez (vocal)