Tesis doctoral de Joan Carles Ferrer Artigas
El centro activo de la citocromo c peroxidasa (ccp) presenta una compleja red de puentes de hidrógeno en la que intervienen moléculas de agua, residuos aminoacídicos de la proteína y substituyentes del propio grupo prostético. Mediante mutagénesis dirigida por oligonucleótidos se ha analizado la relevancia de estos puentes de hidrógeno en el mantenimiento de las propiedades estructurales, electrónicas y funcionales de enzima. mientras que el ion férrico del enzima salvaje es pentacoordinado y presenta un spin electrónico alto, la variante asp235ala muestra tres especies espectroscópicamente diferentes entre ph 5 y 9, todas ellas con un espectro electrónico indicativo de hexacoordinación: una especie de spin alto, que predomina a ph ácido y dos especies de spin bajo que se forman sucesivamente al aumentar el ph. El enzima variante muestra un perfil de actividad-ph en condiciones de estado estacionario prácticamente idéntico al del enzima salvaje, si bien la actividad de la primera es tres órdenes de magnitud inferior. Ello sugiere que el spin electrónico de ion férrico del enzima no tiene una influencia determinante en la velocidad de oxidación de citocromo c. La eliminación del puente de hidrógeno entre el carboxilato de asp235 y his175, ligando proximal del ion férrico, resulta en un enlace de coordinación más debil que, junto a los cambios que tienen lugar en el lado distal del hemo, permite explicar el incremento observado en el potencial de reducción del par fe3+/fe2+ del enzima variante. la variante trp51ala de ccp presenta tres especies espectroscópicamente distinguibles en función del ph, en las que el átomo central de hierro es hexacoordinado. La especie dominante a ph ácido, ls1, posee un espectro electrónico y de dicroismo circular magnético indicativo de spin electrbonico bajo y de una coordinación axial bis-histidina. Hs, la especie que predomina a ph intermedio, muestra unas propiedades es
Datos académicos de la tesis doctoral «Citocromo c peroxidasa: analisis del centro activo y de la interaccion con citocromo c.«
- Título de la tesis: Citocromo c peroxidasa: analisis del centro activo y de la interaccion con citocromo c.
- Autor: Joan Carles Ferrer Artigas
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1999
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Grant Mauk A.
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Planas sauter
- modesto Orozco lópez (vocal)
- ignacio Fita rodriguez (vocal)
- jordi Bujons vilas (vocal)