Tesis doctoral de Fernandez Alvarez Santullano M. Concepcion
El presente trabajo de tesis doctoral se divide en 3 partes. En una primera parte se caracterizan las cepas disponibles y eligen una cepa comensal (n. Sicca p183) y una cepa meningococica (n. Meningitidis v14) para la clonacion del gen tbpb. En esta parte de caracterizacion, se determina tambien el tamaño de la proteina tbp2 en las dos cepas elegidas (77 kda para n. Sicca p183 y 83 kda para n. Meningitidis v14). En la segunda parte se describe la construccion de una genoteca de adn cromosomico de n. Meningitidis v14 en el plasmido puc8 utilizando el metodo de la «perdigonada». Se describe tambien el examen de la genoteca utilizando tres tecnicas diferentes: la deteccion de la proteina activa utilizando un conjugado de transferrina peroxidasa, la deteccion de una fraccion inmunogenica de la proteina utilizando un suero policlonal y la deteccion del gen mediante hibridacion utilizando nucleotidos diseñados a partir de la secuencia del extremo aminoterminal de la proteina previamente purificada. No se detecto ningun recombinante positivo utilizando estas 3 tecnicas. En la tercera parte se describe la clonacion del gen tbpb de n. Sicca p183. para esta clonacion se utilizaron dos estrategias: la clonacion directa de adn especifico de n. Sicca p183, utilizando como sonda un oligonucleotido diseñado a partir de la secuencia amino-terminal de la proteina tbp2 de n. Meningitidis. V14 y la clonacion previa amplificacion del gen mediante pcr. Mediante la primera tecnica se detecto un recombinante que aunque hibridaba con el oligonucleotido, no portaba el gen tbpb. Con la segunda tecnica si se clono el gen tbpb de n. Sicca p183.Confirmada la identidad del inserto clonado, se procede al analisis de su secuencia y a la comparacion de la misma con la de otros genes tbpb de diversas cepas de neisseria.
Datos académicos de la tesis doctoral «Clonacion y caracterizacion del gen que codifica la proteina tbp2 en neisseria sicca p183.«
- Título de la tesis: Clonacion y caracterizacion del gen que codifica la proteina tbp2 en neisseria sicca p183.
- Autor: Fernandez Alvarez Santullano M. Concepcion
- Universidad: Santiago de compostela
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1997
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Manuel Veiga Aneiros
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Bernardez Hermida M. Isabel
- Concepción Herrero Lopez (vocal)
- Carlos María Ferreirós Domínguez (vocal)
- Antonio Torres Rueda (vocal)