Tesis doctoral de Francisco José Fernández Pérez
Ets-1 y usf1 son factores de transcripción implicados en muchos procesos fundamentales del desarrollo y la diferenciación celular. Defectos en su regulación se han asociado con desórdenes patológicos e infecciones virales. ets-1, en particular, es un paradigma del mecanismo de regulación transcripcional en virtud del cual la capacidad de est-1 para unir dna y, por tanto, de transactivación, están silenciadas constitutivamente (autoinhibición). la desrepresión de ets-1 se puede lograr por medio de interacciones proteína-proteína, que desenmascaran el dominio de unión a dna de ets-1 y conducen a la formación de un complejo ternario de gran afinidad entre ets-1, una proteína compañera y el sitio de unión combinado para ambos factores de transcripción. en este trabajo, emprendimos la elucidación estructural del mecanismo de autoinhibición de ets-1. Comenzamos con la clonación, expresión y purificación de ets-1 y las proteínas compañeras usf1 y mafb. A medida que íbamos enfrentando nuevos desafíos, diseñamos métodos y aproximaciones que facilitaran la producción eficaz de proteínas de unión a dna para biología estructural. uno de los conceptos fundamentales que ha reaparecido en el presente estudio es la necesidad de proporcionar a cada proteína un entorno lo más parecido posible al que disfrutan en su contexto biológico. Por ejemplo, la estabilización de ets-1 no fue posible hasta que se añadió el complejo usf1/dna, que semeja las condiciones fisiológicas en las que usf1, unido a dna, recluta ets-1 sobre su sitio de unión. hemos producido con éxito un conjunto de complejos ternarios ets-1/usf1/dna para los cuales hemos buscado condiciones de cristalización. Hemos obtenido cristales, que hemos probado contienen ets-1, usf1 y dna. El refinamiento (optimización) de esas condiciones de cristalizaicón preliminares debería conducir en definitiva a la obtención de cristales de suficiente calidad para
Datos académicos de la tesis doctoral «Cloning, expression, purification and crystallisation of the human ets-1/usf1/dna complex«
- Título de la tesis: Cloning, expression, purification and crystallisation of the human ets-1/usf1/dna complex
- Autor: Francisco José Fernández Pérez
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 06/09/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Matthias Wilmanns
- Tribunal
- Presidente del tribunal: francesc xavier Avilés puigvert
- miquel Coll capella (vocal)
- virtudes Villegas (vocal)
- ignacio Fita (vocal)