Tesis doctoral de Constantino Cespon Otero
Shp-1 es una protein tirosin fosfatasa citoplasmática que se expresa mayoritariamente en células hematopoieticas: en este trabajo describimos un método cuantitativo para la detección de shp-1 en extractos celulares; basado en un elisa de doble reconocimiento entre el mab 2f12 y un anticuerpo policlonal generado en nuestro laboratorio: la sensibilidad del ensayo es de 0.5 ng manteniendo un rango lineal entre 0.2 – 4 ng. Como curva standard utilizamos shp1 recombinante y nativa; plurificada por afinidad de la fracción citosólica de bazo humano los valores obtenidos con ambas curvas se compararon mediante el coeficiente de correlación obteniéndose un valor de r=0,99 utilizando este método analizamos el contenido de shp1 en líneas celulares; linfocitos de bazo y leucemias; no detectando la expresión de shp1en los linfocitos procedentes de un paciente con el síndrome de sezary; ni en la linea celular relacionada, hut-78 estos resultados se confirmaron mediante western y northern blot. Se ha estudiado la especificidad de sustrato de shp1 utilizando como sistema la fracción citosólica de plaquetas humanas inactivadas; y fosforiladas con la ptk src: en este sistema shp1 no mostró especificidad de sustrato desfosforilando la mayoría de las bandas fosforiladas por src. Como posible mecanismo de regulación analizamos el efecto de oxidantes y reductores sobre la actividad enzimática de shp1 el gssg puede inhibir la actividad del enzima a concentraciones proximas a las fisiologicas probablemente a través de la formación de puentes disulfuro con los grupos tiol del enzima. La identificación de lagst pi humana como la proteína uq copurifica con shp1 de bazo y su posible regulador sobre la actividad fosfatasa; son también discutidos.
Datos académicos de la tesis doctoral «Desarrollo de un metodo cuantitativo para la determinacion de la protein tirosin fosfatasa shp-1 y estudio de aspectos funcionales de esta proteina.«
- Título de la tesis: Desarrollo de un metodo cuantitativo para la determinacion de la protein tirosin fosfatasa shp-1 y estudio de aspectos funcionales de esta proteina.
- Autor: Constantino Cespon Otero
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1998
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Pedro Gonzalez Porque
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Sillero Repullo
- Miguel Lopez Botet Arbona (vocal)
- Eladio Montoya Melgar (vocal)
- Juan Lopez Fando (vocal)