Tesis doctoral de Vazquez Tatay Manuel Enrique
Los genes informadores son herramientas que tienen una gran variedad de aplicaciones en biología molecular. El trabajo desarrollado en esta tesis doctoral se basa en la utilizacion de los genes luc y lucor como genes informadores. Para ello se han diseñado y construido una serie de vectores para expresar estos genes en diferentes bacterias gram negativas. Se clonaron los genes luc y lucor bajo el control de los promotores r1, pr, y ptrc en un vector de amplio rango de hospedador. A partir de aqui se seleccionaron las fusiones pr: lucor y laciq-ptrc: lucor y se construyeron una serie de minitransposones para el marcado cromosomico y estable de bacterias gram negativas. A continuacion se realizaron diferentes aplicaciones con las distintas construcciones desarrolladas. En primer lugar se diseño un metodo rapido y facil con el gen luc para determinar el numero de copias de plasmido. En segundo lugar, se ha aplicado la bioluminiscencia a la interaccion rhizobium-leguminosa, por un lado se describe un metodo que facilita los estudios de ocupancia de nodulos mediante el marcado de cepas de rhizobium con el gen luc; por otro lado, se ha establecido por primera vez en rhizobium un plasmido derivado del replicon r388 que marcado con el casete ci857-pr: lucor resulto totalmente estable en rhizobium; y por ultimo, se ha aplicado una camara amplificadora de fotones a la deteccion y seguimiento de rizobios marcados con el plasmido peb42c en las primeras etapas de la simbiosis. En tercer lugar, se han construido dos minitransposones, pteb311 y pteb411, con los genes lucor y luc sin promotor para utilizarlos como sondas en la busqueda al azar de regiones promotoras. En cuarto lugar se ha desarrollado un vector sonda, psor, con el gen lucor como informador en la busqueda de promotores, para determinar expresion genica en organismos procariotas. En ultimo lugar se ha establecido un sistema modelo para el analisis de transferencia de plasmidos b
Datos académicos de la tesis doctoral «Diseño y construccion de vectores con genes de luciferasa eucarioticos como sistema informador. aspectos aplicados.«
- Título de la tesis: Diseño y construccion de vectores con genes de luciferasa eucarioticos como sistema informador. aspectos aplicados.
- Autor: Vazquez Tatay Manuel Enrique
- Universidad: Sevilla
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1997
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Antonio Palomares Díaz
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Julio Rodríguez Villanueva
- Rafael Sentandreu Ramon (vocal)
- José Olivares Pascual (vocal)
- Jordi Lalucat Jo (vocal)