Tesis doctoral de Carolina Sanz Monte
Halobacterium salinarum sintetiza la proteína bacteriorrodopsina, que forma la llamada membrana púrpura, cuando la concentración de oxígeno en el medio es insuficiente para el funcionamiento de la cadena respiratoria. la bacteriorrodopsina posee una molécula de retinal unida, la cual absorbe energía lumínica e inicia un fotociclo que da como resultado el transporte de protones desde el medio citoplasmático al medio externo. El gradiente de protones creado es utilizado por la atpasa para la síntesis de atp. el objetivo del trabajo ha sido profundizar en el conocimiento del proceso de expulsión del protón al medio externo, así como en la localización de los cationes divalentes que están fijados a la membrana purpura, los cuales son necesarios para un transporte correcta y eficaz. para el estudio se construyeron los mutantes extracelulares e9q,e74q, e194q, e204q, e9q+e74q+e194q+e204q (4glu) y los citoplasmáticos d36n+d38n y d102n+d104n. las titraciones de los mutantes en medio ácido nos indican que el pka del aspártico 85, contraión de la base de schiff, está aumentado en d102n+d104n, e194q, e204q y 4glu en agua. Las diferencias con los resultados encontrados en 150 mm kc1 sugieren que estos grupos están involucrados en la unión de cationes. Por otro lado, el mutante 4glu presenta un equilibrio entre dos formas, forma roja y forma púrpura, ya que las mutaciones han producido un cambio en el entorno del aspático 85, el cual puede ser restaurado por la adición de cantidades elevadas de ión cloruro. Los estudios de dsc, asi como la reacción de la hidroxilamina indican que las mutaciones de los glutámicos 194 y 204 provocan una descompactación de las hélices, una menor estabilidad de la proteina, y un mayor acceso de la base de schiff al medio. Funcionalmente, el mutante e194q y 4glu parecen tener una producción de intermediario m disminuida, y los estadios por ftir indican que el pka del glutámico glu 194 esta
Datos académicos de la tesis doctoral «Disseny i expressió de bacteriorodopsines mutans en halobacterium salinarum. estudi estructural i funcional«
- Título de la tesis: Disseny i expressió de bacteriorodopsines mutans en halobacterium salinarum. estudi estructural i funcional
- Autor: Carolina Sanz Monte
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 04/04/2000
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Esteve Padrós Morell
- Tribunal
- Presidente del tribunal: joan Manyosa
- Antonio Zorzano olarte (vocal)
- gerard Leblanc (vocal)
- angel Mozo (vocal)