Tesis doctoral de Ana Isabel Gracia Lostao
En la memoria de tesis presentada se han abarcado cuatro problemas de enorme interés en el estudio de las flavoproteínas que han sido escasamente estudiados, como es el mecanismo de unión de las flavinas a las apoproteínas; la energética de los complejos que determinan, mediante la cuantificación de la contribución energética de cada parte del cofactor a la estabilidad de la holoflavoproteína y realizando un estudio termodinámico-estructural del estado de transición de los complejos; el estudio de modulación de potenciales rédox de las flavinas por las apoproteínas; y la determinación del residuo que actúa como entrada de electrones a la flavina en la apoproteína. para este trabajo se han elegido la flavodoxina de la cianobacteria anabaena pcc 7119 como modelo de estudio puesto que su gen está clonado y la proteína recombinante se expresa con buenos rendimientos. para ello se han determinado las constantes de disociación y las constantes de velocidad de unión de los complejos de apoflavodoxina silvestre y mutantes del sitio de unión con fmn, riboflavina (fmn sin fosfato) y lumiflavina (fmn sin fosfato y sin ribitol) a fuerza iónica y concentración de fosfato variables. Asimismo se han determinado los potenciales rédox de los complejos mutantes y se han analizado la interacción de la proteína silvestre y mutantes con el fmn por calorimetría de titulación a diferentes condiciones para completar el estudio termodinámico del sistema. En este trabajo se han utilizado una gran variedad de técnicas: cinética de flujo detenido, espectrofluorimetría, dicroísmo circular, absorbancia en el uv-visible, calorimetría diferencial de barrido, manejo de electrodos para determinación de potenciales de óxido-reducción, manejo de sistemas de anaerobiosis, fotólisis por pulso de láser, espectroscopía paramagnética electrónica, cultivos de células a mediana escala y otras. el cumplimiento de estos
Datos académicos de la tesis doctoral «El complejo apoflavodoxina-fmn; formacion, estabilidad y modulacion del potencial redox del cofactor por aminoacidos del sitio de union.«
- Título de la tesis: El complejo apoflavodoxina-fmn; formacion, estabilidad y modulacion del potencial redox del cofactor por aminoacidos del sitio de union.
- Autor: Ana Isabel Gracia Lostao
- Universidad: Zaragoza
- Fecha de lectura de la tesis: 30/04/1999
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Javier Sancho Sanz
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Carlos Gomez-moreno calera
- Manuel Cortijo (vocal)
- Miguel ángel De la rosa acosta (vocal)
- Antonio Parody morreale (vocal)