Tesis doctoral de Diaz Pereira José Fernando
Se ha preparado tubulina purificada con el nucleotido de su sitio-e intercambiado por gdp. Esta tubulina-gdp, normalmente inactiva, ensambla en microtubulos mediante la accion de las drogas antitumorales taxol y taxotere. los microtubulos formados tienen la misma estructura que los inducidos a partir de tubulina-gtp. El ensamblaje inducido por los ligandos es maximo a concentraciones equimoleculares de taxol o taxotere con tubulina, y ambos ligandos se unen a los microtubulos con una estequiometria de 0,99 +- 0,04 ligandos por dimero de alfa beta-tubulina ensamblado. El taxotere compite con el taxol por el sitio de union, con una afinidad aparente 1,9 +- 0,1 mayor. El sistema de ensamblaje de tubulina-gdp inducido por taxoides esta fuertemente acoplado a la union de un taxoide. La elongacion inducida por taxoides de tubulina-gtp se lleva a cabo con un incremento de energia libre aparente tan solo -2,5 +- 0,4 kj mol elevado -1 mayor que la elongacion de tubulina-gdp. Esto sugiere que la union de los taxoides cambia la conformacion de la tubulina-gdp a una forma activa. Aunque pueden sugerirse varios mecanismos de accion, el mas atractivo es el que propone que los taxoides son ligandos bidentados, que se unen a la tubulina participando en el contacto lateral de esta molecula con la siguiente molecula que se incorpora al microtubulo. Se ha obtenido el perfil de dispersion de rayos-x a 3 nm de resolucion de los microtubulos inducidos por taxotere. Esto ha revelado que los microtubulos inducidos por taxotere tienen 13 protofilamentos, como se ha comprobado por microscopia electronica. Se ha obtenido una evidencia directa de la existencia de intermedios en la formacion de los microtubulos, los cuales son fragmentos de pared microtubular.
Datos académicos de la tesis doctoral «Ensamblaje de proteina inducido por ligando.«
- Título de la tesis: Ensamblaje de proteina inducido por ligando.
- Autor: Diaz Pereira José Fernando
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1993
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Andreu Morales José Manuel
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Angel Martin-municio Aguado
- Margarita Menendez Fernandez (vocal)
- Manuel Cortijo Merida (vocal)
- Juan Bordas Ordinell (vocal)