Tesis doctoral de Joan Torrent Mas
Para analizar la contribucion de la region c-terminal propuesta como iniciadora del plegamiento (cfis 106-118) en la estabilidad de la rnasa a, los residuos alifaticos de esta region fueron sustituidos, mediante mutagenesis dirigida, por otros residuos en los cuales la cadena lateral alifatica era progresivamente recortada. La mayor parte de las sustituciones proyectadas suponian deleciones no disruptivas de grupos metilo (eno). ademas, se reemplazo la tyr115 por un trp, de forma que, potencialmente, se introducia una unica sonda fluorescente, no desestabilizadora, para seguir los cambios conformacionales que se puedieran generar en la region durante el proceso de plegamiento/desplegamiento de la proteina. tanto los parametros cineticos, como los espectros de ftir y cd, determinados para cada uno de las ribonoucleasas variantes, indican que las sustituciones aminoacidicas efectuadas presentan, en general, poco o ningun efecto en la estructura nativa y en la actividad de la enzima. se utilizo la espectroscopia de adsorcion ultravioleta de cuarta derivada, la fluorescencia (para la variante con trp) y la espectroscopia de infrarrojo por transformada de fourier, para seguir y caracterizar, en condiciones de equilibrio, las transiciones conformacionales de cada variante en funcion de la presion y de la temperatura. Los resultados se compararon con los que se obtuvieron por la proteina salvaje. Para determinar mas a fondo las caracteristicas del proceso de desplegamiento de la variante y115w, las transiciones de desnaturalizacion inducidas por urea de esta variante y de la proteina salvaje, fueron examinadas mediante electroforesis en gradiente de urea y espectroscopia de fluorescencia. curiosamente, los cambios conformacionales que resultan de la desnaturalizacion por presion son muy parecidas a los que se obtuvieron por temperatura. enfrente de un aumento gradual tanto de presion como de temperatura, la estructura terciaria i los eleme
Datos académicos de la tesis doctoral «Estabilitat conformacioinal de variants de la ribonucleasa a: pressio i temperatura com a inductors del desplegament proteic«
- Título de la tesis: Estabilitat conformacioinal de variants de la ribonucleasa a: pressio i temperatura com a inductors del desplegament proteic
- Autor: Joan Torrent Mas
- Universidad: Girona
- Fecha de lectura de la tesis: 26/07/2000
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Vilanova Brugues
- Tribunal
- Presidente del tribunal: claudi Cuchillo foix
- victoria Nogues bara (vocal)
- reinhard Lange (vocal)
- Antonio Planas sauter (vocal)