Tesis doctoral de Jorge Lloberas Cavero
Se ha aislado y caracterizado una cepa de bacillus licheniformis que expresa de forma constitutiva una actividad beta-glucanasa. El enzima es excretado al medio con una eficiencia de un 99%. Se ha determinado que el enzima hidroliza selectivamente enlaces beta-1,4, entre unidades de glucosa del polimero beta-glucano de cebada, oligosacarido de enlaces mixtos. Ademas, requiere para esta actividad la presencia de un enlace beta-1,3 adyacente al hidrolizado, entre las unidades de glucosa. puede hidrolizar oligosacaridos con enlaces unicos beta-1,3, pero no con enlaces unicos beta-1,4. Por todo ello se concluye que se trata de una actividad endo-beta-1,3-1,4-d-glucanasa (ec 3.2.1.73). Los productos finales de la accion de este enzima son dos moleculas, compuestas por 3 y 4 residuos de glucosa, cada una de ellas posee un enlace beta-1,3 entre los dos residuos de glucosa iniciales, el resto son enlaces del tipo beta-1,4. El enzima actuaria sobre el sustrato en dos fases, dando lugar a unos productos intermedios que vuelven a ser sustrato del enzima, hasta generar los productos finales antes mencionados. Se ha purificado la actividad endo-beta-1,3-1,4-d-glucanasa, mediante precipitacion salina y posterior cromatografia en gel filtracion, resultando una proteina con un peso molecular de 25500 da y de forma monomerica. Pese a la extraccion y posterior tratamiento, el enzima mantiene su actividad intacta, incluso en presencia de sds en geles de electroforesis. Se ha caracterizado el enzima, determinandose las siguientes propiedades fisicoquimicas: su coeficiente de extincion a 280 nm es de 30172 mol-1 cm-1. Su punto isoelectrico es de 4.7 ph optimo 7.2, temperatura optima 55 c. Presenta un nivel de resistencia al ph y a la temperatura muy elevado. Asimismo su actividad se ve influida por la presencia de agentes reductores, que incrementan su actividad hasta un 240%. se ha determinado tambien el efecto de diversos iones metalicos y com
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio de la actividad endo-beta-1,3-1,4-d-glucanasa de bacillus licheniformis: purificacion, clonaje, secuenciacion y prediccion de estructura.«
- Título de la tesis: Estudio de la actividad endo-beta-1,3-1,4-d-glucanasa de bacillus licheniformis: purificacion, clonaje, secuenciacion y prediccion de estructura.
- Autor: Jorge Lloberas Cavero
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1991
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Enrique Querol Murillo
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jaume Palau Albero
- Francesc Xavier Avilés Puigvert (vocal)
- Miquel Llober Sande (vocal)
- Carlos Casas Albero (vocal)