Tesis doctoral de Silvana Pavía Vilá
El pci es una proteína de 39 aminoácidos con una estructura globular central de 27 residuos y dos colas, n-terminal y c-terminal. La parte globular de la proteína presenta una hélice 3 10, como única estructura secundaria regular, así como 4 bucles (loops) y está estabilizada por tres puentes disulfuro formados por las cisteínas c8-c27, c12-c24 y c18-c34. La presencia de estos puentes disulfuro nos permtie estudiar el replegamienyo del pci a través de la captura de los intermediarios que se forman en el proceso de plegamiento a apartir de la proteína reducida. Esto permite conocer el número de intermediarios dependientes de disulfuro, su diversidad, su estructura y sus propiedades, proporcionándonos información sobre el mecanismo de plegamiento. en una primera fase del presente trabajo, hemos estudiado el aislamiento y la purificación de los intermediarios con tres puentes disulfuro (denominados «scrambled species» a partir de la mezcla de intermediarios que se obtiene tras efectuar el replegamiento del pci a partir de pci purificado o a partir de cultivos de c. Coli que expresan pci. Así mismo, hemos realizado una caracterización estructural de los intermediarios «scrambled» aislados en forma pura, se han determinado sus constantes de inhibición, éstas son del orden um (unas 1000 veces superiores a la estimada para el pci nativo). también se ha determinado cuáles son las cisteínas implicadas en cada uno de los puentes disulfuro de la estructua de tales epecies mediante digestión proteolitíca y mediante reducción química paracial de un puente disulfuro. en una segunda fase, hemos estudiado la última etapa del camino de plegamiento del pci, etapa donde las especies «scrambled» rompen y vuelven a formar sus puentes disulfuro para dar lugar a la estructura nativa. Estos experimentos han probado que el plegamiento del pci no tiene lugar a través de una vía úncia sino que se dan múltiples vías paralelas. Finalmen
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudios sobre el mecanismo de pelgamiento del inhibidor proteico de carboxipeptidasa de patata (pci)«
- Título de la tesis: Estudios sobre el mecanismo de pelgamiento del inhibidor proteico de carboxipeptidasa de patata (pci)
- Autor: Silvana Pavía Vilá
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 16/03/2000
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Francesc Xavier Avilés Puigvert
- Tribunal
- Presidente del tribunal: rafael De llorens duran
- lluís Catasús cols (vocal)
- enrique Querol murillo (vocal)
- xavier Jorba barguño (vocal)