Tesis doctoral de Juan Fernando Martinez Leal
En el trabajo se ha optimizado el ensayo de mutaciones en sitios de restriccion (rsm), que permite la deteccion de mutaciones en sitios de restriccion del dna de cualquier tejido de cualquier ser vivo. Consiste en la digestion del dna a analizar con la restrictasa adecuada, de forma que las moleculas silvestres se cortaran y las mutantes, que quedan intactas seran amplificadas por pcr. experimentos de reconstruccion con plasmidos mostraron que la sensibilidad del ensayo era de una molecula mutante entre 10.000.000 de copias silvestres. No todas las restrictasas analizadas mostraron la eficiencia necesaria para su uso en rsm. Los problemas de contaminacion cruzada se resolvieron aislando las zonas pre y postpcr. Se realizaron ensayos in vivo con bacterias silvestres o deficientes en alquil transferasas. Se comprobo una sensibilidad de una secuencia mutante entre 100.000 genomas, pudiendose observar la progresion de los procesos de reparacion del daño en el dna. Experimentos con celulas humanas mostraron una sensibilidad similar, asi como la reparacion del daño.
Datos académicos de la tesis doctoral «Mutagenesis en sitios de restriccion: nueva metodología para detectar in vivo mutaciones del dna.«
- Título de la tesis: Mutagenesis en sitios de restriccion: nueva metodología para detectar in vivo mutaciones del dna.
- Autor: Juan Fernando Martinez Leal
- Universidad: Córdoba
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1996
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Lopez Barea
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Rodero Franganillo
- Ricard Marcos Dauder (vocal)
- Felipe Cortes Benavides (vocal)
- Nieves Abril Diaz (vocal)