Tesis doctoral de Ana Isabel Lermo Soria
Al camp alimentari hi ha una creixent demanda de metodologies analítiques que siguin rí pides, selectives i econí²miques, que permetin la detecció de diferents contaminants alimentaris per a garantir la seguretat del producte al llarg de la cadena alimentí ria de producció. En aquest context, els biosensors electroquímics s¿alcen com a candidats ideals com alternativa a la instrumentació analítica convencional per a l¿aní lisi fora de l¿í mbit del laboratori. en aquesta tesi es van desenvolupar nous dissenys biomoleculars basats en biosensors electroquímics per a la seguretat alimentí ria abordant tres aspectes crítics dels dispositius biosensors, que convergeixen cap a la simplificació metodolí²gica: la immobilització orientada del biomaterial, la marcació i la transducció del senyal electroquímic. donada l¿experiéncia del nostre grup d¿investigació en la fabricació de compí²sits de grafit-epoxi (gec) i els avantatges electroquímics demostrats d¿aquest material, es van construir nous transductors electroquímics basats en compí²sits rígids per a la immobilització orientada de biomolécules per aconseguir la simplificació metodolí²gica en la detecció de dna i immunoespécies. Els nous transductors construí¯ts es van basar en: i) biocompí²sits de grafit-epoxi modificats en volum amb la proteí¯na avidina (av-geb), i ii) compí²sits amb un element magnétic integrat (m-gec). Els biocompí²sits d¿avidina constitueixen una plataforma universal per a la immobilització directa orientada de material biolí²gic biotinilat, mitjaní§ant la forta unió avidina-estreptavidina. El propi transductor actua com a reservori de material biolí²gic i es pot renovar amb un simple procediment de polit, obtenint una nova superfície per cada assaig. Els magneto eléctrodes permeten la integració de partícules magnétiques als procediments biosensors per tal de realitzar les reaccions biolí²giques de biorreconeixement en solució, reduint la complexitat de la matriu de les mostres i preconcentrant l¿aní lit, obtenint així, una detecció més sensible. es va dissenyar una nova estratégia de detecció de dna provinent de mostres reals dels bacteris patí²gens salmonella i escherichia coli, mitjaní§ant la incorporació d¿encebadors magnétics marcats a la mescla de reacció de la pcr. A part d¿amplificar la quantitat de dna, es va aconseguir marcar doblement el producte amplificat amb biotina i digoxigenina, per aconseguir la immobilització posterior a partícules magnétiques recobertes d¿estreptavidina o av-geb i la unió d¿un conjugat enzimí tic per a detectar el producte amplificat. Així es van obtenir uns protocols simples, rí pids i molt sensibles. Aquests protocols van demostrar ser més sensibles en comparació amb la técnica clí ssica de pcr quantitativa amb sistema taqman i gels d¿electroforesi. també es van obtenir resultats molt prometedors incorporant a la pcr un encebador magnétic, encebador unit a partícules magnétiques. Així, es va aconseguir l¿amplificació directa a la superfície de les partícules magnétiques, simplificant la metodología. Aquesta estratégia presenta potencial aplicabilitat per a la detecció directa electroquímica de productes amplificats al termociclador de la pcr. a l¿últim bloc de la tesi es va desenvolupar una estratégia immunosensora simplificada, en la que l¿hapté es va immobilitzar a partícules magnétiques recobertes de grups químics tosil, formant un enllaí§ covalent amb la molécula de naturalesa hapténica. Amb aquesta estratégia es va aconseguir quantificar l¿í cid fí²lic en mostres cegues de llet enriquida, obtenint valors de recuperació propers al 100%; i quantificar l¿í cid fí²lic en mostres reals de llet enriquida, obtenint valors molt propers als indicats a la composició dels productes.
Datos académicos de la tesis doctoral «Nous dissenys biomoleculars en genosensors i immunosensors per a la seguretat alimentÁ ria«
- Título de la tesis: Nous dissenys biomoleculars en genosensors i immunosensors per a la seguretat alimentÁ ria
- Autor: Ana Isabel Lermo Soria
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 29/06/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Isabel Pividori Gurgo
- Tribunal
- Presidente del tribunal: jordi Bartroli molins
- hideko Yamanaka (vocal)
- (vocal)
- (vocal)