Tesis doctoral de Sílvia Bronsoms Fabrellas
El pci, la hirudina y el lci forman parte de la familia de proteínas pequeñas y ricas en puentes disulfuro, que contiene un gran nombre de biopéptidos con potenciales aplicaciones biotecnologícas, como son los factores de crecimiento, las toxinas, las desintegrinas o los inhibidores de proteasas. la presencia de los puentes disulfuro provoca que la expresión recombinante de estas proteínas sea compleja. En el primer trabajo de la tesis se estudian tres sistemas de producción recombinante: un sistema eucariota (pichia pastoris) y dos sistemas procariotas (escherichia coli). Se optimizan varios parámetros para la mejora de su nivel de producción y se buscan sistemas que permitan simplificar su proceso de purificación. E.Coli con una producción final de proteína que es 10 veces superior al sistema de partida. en el segundo trabajo se analiza el papel de las regiones precursora del pci en el plegamiento de la forma madura. Se analiza el proceso de replegamiento oxidativo in vitro de las distintas pro-formas del pci para caracterizar su influencia sobre la velocidad o eficiencia de plegamiento de la forma madura. También se estudia la influencia de la pro-región n-terminal sobre el proceso de plegamiento in vivo en e.Coli del pci maduro y de una serie de mutantes que presentan un mal plegamiento o un bajo nivel de expresión recombinante. Finalmente se lleva a cabo una caracterización estructural de la forma correspondiente al pci con la pro-región n-terminal a través de estudios de intercambio protón/deuterio, exoproteólisi limitada, dicroísmo circular y resonancia magnética nuclear. en el último trabajo se analiza el proceso de plegamiento proteico de la hirudina y del lci mediante el estudio de las reacciones de intercambio protón/deuterio seguidas por espectrometría de masas maldi-tof. Se caracteriza la adquisición de estabilidad conformacional durante el proceso de plegamiento de las dos proteínas. Se aíslan
Datos académicos de la tesis doctoral «Proteínas pequeñas y ricas en puentes disulfuro como modelos de producción recombinante y plegamiento«
- Título de la tesis: Proteínas pequeñas y ricas en puentes disulfuro como modelos de producción recombinante y plegamiento
- Autor: Sílvia Bronsoms Fabrellas
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 30/09/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Francesc Xavier Avilés Puigvert
- Tribunal
- Presidente del tribunal: enrique Querol murillo
- Antonio Planas sauter (vocal)
- Juan José Calvete chornet (vocal)
- joaquin Abian moñux (vocal)