Tesis doctoral de Puente Novoa José Manuel
En este trabajo, se ha aislado una actividad proteín quinasa c a partir de bazo de rodaballo mediante tres pasos cromatográficos: deae, fenil-sefarosa y treonín-sefarosa. La actividad era calcio-fosfolípido dependiente, se inhibía por h7 y en western blot se obtenían dos bandas, una de 80 y otra de 100 kda. Con el monoclonal mc5. Las concentraciones óptimas de activadores para su plena actividad eran 0.1 mm calcio, 20 microg/ml fosfatidilserina y 2 microg/ml diacilglicerol. La pkc purificada fosforiló con alta eficiencia dos sustratos específicos: marcks151-175 y egfr651-658, y fue inhibida específicamente por dos péptidos pseudosustrato: pkc19-36 y pkc19-31. Por western blot, se demostró que la actividad purificada contenía seis isoformas: alfa, beta, delta, epsilon, zeta y lambda, mientras que en extracto crudo de bazo se detectaron las seis anteriores, mu y theta. Alfa presentaba dos formas de distinto peso molecular, una de 80 y otra de 100 kda. Cargando la actividad purificada en una mono q, se obtuvieron dos picos de actividad, en uno de los cuales están presentes delta y lambda. El análisis de la expresión de isoformas de pkc en diferentes tejidos de rodaballo: hígado, gónada, músculo, corazón, cerebro, intestino, aleta caudal y riñón; demostró que las isoformas alfa (con una masa de 100 kda.), Beta, delta, epsilon, lambda y mu, están presentes en todos los tejidos. Zeta se detectó en todos salvo en músculo, mientras que gamma y theta están presentes en cerebro y en músculo y cerebro, respectivamente.
Datos académicos de la tesis doctoral «Protein quinasa c en rodaballo (scophthalmus maximus). caracterizacion y expresion en tejidos.«
- Título de la tesis: Protein quinasa c en rodaballo (scophthalmus maximus). caracterizacion y expresion en tejidos.
- Autor: Puente Novoa José Manuel
- Universidad: Santiago de compostela
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1998
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Manuel Rey Méndez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Germán Sierra Marcuño
- Ignacio Ramos Martinez (vocal)
- Barja Perez Juan Luis (vocal)
- Amando Garrido Pertierra (vocal)