Tesis doctoral de Ariel Streitenberger Sergio
El crecimiento de un microorganismo como aerococcus viridans con glicerol como única fuente de carbono, induce la síntesis de las enzimas glicerol fosfato oxidasa y lactato oxidasa. Cuando hay altos niveles de estas enzimas, el glicerol es rápidamente convertido a fosfato de dihidroxiacetona. Este último activa la ruta de síntesis de metilglioxal y genera fósforo inorgánico. el objetivo general de este trabajo es purificar las enzimas lactato oxidasa y glicerol fosfato oxidasa para proceder posteriormente a su caracterización cinética y estudio. Para lo cual se optimizaron las condiciones de crecimiento de microorganismo para la máxima producción enzimática, se desarrollo un sistema de purificación para ambas enzimas y se realizo la coinmobilización de laenzima glicerol fosfato oxidasa y de aerococcus viridans con catalasa para la producción de fosfato de dihidroxiacetona. La enzima lactato oxidasa fue purificada con una primera digestión con lisozima y triton x-114, una posterior clarificación con ctab, una precipitación con sulfato amónico y finalmente una columna de intercambio iónico. El grado de purificación obtenido fue de 32 veces, con una recuperación el 60% de la actividad enzimática y una actividad específica de 114.5 ue/mg proteina.La enzima purificada presento un aperente peso molecular de 48000 en condiciones disociantes en un gel de policacrilamida y el peso molecular de la enzima en su forma nativa, estimado por filtración en gel, de policacrilamida y el peso molecular de la enzima en su forma nativa, estimado por filtración en gel, fue de 187000 encontrándose en forma tetramérica. En cuanto a los inhibidores utilizados, se desarrollo un detallado estudio cinético de cibacron blue 3ga, que presento un tipo de inhibición dependiente del tiempo y ph. Luego de la obtención de la apoenzima de lactato oxidasa, esta se recuperó totalmente con la adición de fmn o fad, observándose una afinidad 51 v
Datos académicos de la tesis doctoral «Purificacion y caracterizacion cinetica de oxidasas de aerococcus viridans implicadas en el metabolismo del glicerol.«
- Título de la tesis: Purificacion y caracterizacion cinetica de oxidasas de aerococcus viridans implicadas en el metabolismo del glicerol.
- Autor: Ariel Streitenberger Sergio
- Universidad: Murcia
- Fecha de lectura de la tesis: 16/02/2001
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Francisco García Carmona
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Lopez roca José María
- José álvaro Cebrián pérez (vocal)
- estenio Sansinanea aldo (vocal)
- Juan a mercedes Cabanes cos (vocal)