Tesis doctoral de Juan Antonio Cedano Rodríguez
Introducción las beta(l-3)(l-4) glucanasas son enzimas de gran interés biotecnólogico tanto en la industria cervezera como en la de fabricación de piensos. los objetivos de esta tesis han sido: rediseñar la glucanasa de bacillus licheniformis con objeto de tratar de mejorar la actividad enzimática y determinar la función del lazo mayor del centro activo en dicho proceso, así como analizar y rediseñar la estabilidad térmica del enzima, en particular determinar la influencia del lazo mayor en la desnaturalización térmica, relacionándolo con el proceso y tipo de plegamiento. análisis de los mutantes de saturación en la posición 58 de glucanasas 1,- la reducción de volumen de la cadena lateral aumenta la actividad, aumentando la constante catalítica kcat, si bien disminuye la km. El mutante m58g presenta la actividad más alta, hasta 6 veces más que el silvestre, y elmutante m58a presenta más de 4 veces la actividad del silvestre, ambos, en términos de kcat/km. 2,- los residuos hidrófilos disminuyen la actividad. 3,- unicamente en mutantes aromáticos como m58f y m58w, se aprecia una disminución de valores de km, respecto al enzima silvestre. el análisis de la termorresistencia 1,- con respecto al medio, serían claves el ph (por pérdida de interacciones ph dependientes), el tampón (por su posible papel quelante), y la presencia de sustrato (porque estabilizaría). 2,- con respecto a la estructura serían claves los aminoácidos del lazo y la coordinación del ca++. La coordinación del ca++ puede ser mejorada introduciendo una nueva interacción entre el catión y la beta 15, como en el caso del mutante n236d. 3,- finalmente, la termoinactivación de la glucanasa de bacillus licheniformis, en todos los mutantes estudiados, siguen un patrón bifásico. Su análisis cinético permite justificar el efecto de diversos mutantes y el comportamiento del enzima frente a la temperatura.
Datos académicos de la tesis doctoral «Rediseño de la eficiencia catalítica y de la termorresistencia de la beta (i-3)(i-4)glucanasa de bacillus licheniformis«
- Título de la tesis: Rediseño de la eficiencia catalítica y de la termorresistencia de la beta (i-3)(i-4)glucanasa de bacillus licheniformis
- Autor: Juan Antonio Cedano Rodríguez
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 11/12/2001
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Enrique Querol Murillo
- Tribunal
- Presidente del tribunal: francesc xavier Avilés puigvert
- Rafael De llorens duran (vocal)
- angel Mozo villarias (vocal)
- baldomero Oliva Miguel (vocal)