Tesis doctoral de Belen Calles Arenales
La transcripción del fago 029 tiene lugar en dos etapas reguladas por la proteína viral p4, que reprime los principales promotores tempranos, a2b y a2c, y activa el promotor tardío a3. La proteína p4 tiene dos sitios de unión en el promotor a2c (sitio 1, centrado en posición -39, y sitio 2, centrado en -71 y reconocido por p4 solo en presencia de rna polimerasa) y un tercer sitio localizado por detrás del promotor a3 (centrado en -82). tanto la activación del promotor a3 como la represión del promotor a2c dependen de la interacción directa entre el residuo arg-120 de p4 y el dominio c-terminal de la subunidad alfa de la rnap. No se conocían los residuos del alfa-ctd de la rnap implicados en la interacción con la proteína reguladora p4, aunque se había determinado que la regulación de la transcripción de los promotores a3 y a2c, se pierde en presencia de una rnap reconstituída con subunidades alfa delecionadas, que carecen de los útlimos 15 residuos. en conjunto, estos resultados sugerían que podía existir una interacción de tipo electrostático que implicarse la arg 120 de p4 y alguno de los residuos de carga negativa entre los útlimos 15 de la subunidad alfa, o cercano a ellos. Tras sustituir todos los residuos de carga negativa de esta región por ala se ha podido comprobar que ninguno de ellos es necesario en la interacción con p4. Sin embargo, la sustitución de uno de los residuos, concretamente un glu en posición 297 de la subunidad alfa, dio lugar a una rnap que no puede transcribir el promotor a3 en presencia de p4, es decir, la activación del promotor a3 se pierde en presencia de una rnap reconstituída con subunidades alfa en las que se ha mutado este residuo de carga negativa. Aunque p4 puede estabilizar la rnap mutante como complejo cerrado en el promotor a3, con la misma eficiencia que a la rnap silvestre, y estos complejos cerrados evolucionan a complejos abiertos, se ha comprobado que los complejos a
Datos académicos de la tesis doctoral «Regulación de la transcripción de los promotores a3 y a2c del bacteriófago 029 de bacillus subtilis. función de las proteínas p4 y p6«
- Título de la tesis: Regulación de la transcripción de los promotores a3 y a2c del bacteriófago 029 de bacillus subtilis. función de las proteínas p4 y p6
- Autor: Belen Calles Arenales
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 01/03/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Margarita Salas Falgueras
- Tribunal
- Presidente del tribunal: manuel Espinosa padrón
- Castrillo diez José Luis (vocal)
- victor De lorenzo prieto (vocal)
- mario Mencia caballero (vocal)