Tesis doctoral de Patricia González Santamaría
La fase de lectura abierta ydl097c, asignada el gen rpn6, es esencial para el crecimiento vegetativo en saccharomyces cerevisiae. La proteína codificada por ydl097c, denominada rpn6, es una subunidad reguladora del protesoma 26s, proteasa celular responsable de la degradación citoplasmática. se generaron cepas de levadura en las que la copia genómica de rpn6 está eliminada (rpn6-a1), de forma que las células mutantes expresan condicionalmente la proteína en un medio de cultivo adecuado. En ausencia de rpn6p se produce una acumulación progresiva de proteínas multiubiquitinadas, y la proteína homóloga s9 del proteasoma humano complementa la mutación rpn6-a1. Tras incubaciones prolongadas en el medio restrictivo, las células mutantes en rpn6 cesan su crecimiento, deteniéndose en metafase. las células muestra un fenotipo terminal uniforme, característico de una parada en metafase: células dobles que no han sufrido citocinesis, contenido 2c de adn, núcleo no dividido con un huso mitótico corto e intranuclear, y elevados niveles de actividad quinasa asociada a cdc28. Asimismo, los sustratos de la enzima ligasa apc, pds1 y clb2, se acumulan en las células de cepa mutante condicional en condiciones restrictivas. La función de rpn6 es esencial en mitosis, en concreto para que tenga lugar la anafase. por otra parte, se purificaron proteasomas a partir de las células de la cepa rpn6-a1 mediante cromatografía de afinidad. Los proteasomas obtenidos muestran una actividad peptidasa inferior a la de proteasomas silvestres, mientras que su actividad atpasa es idéntica. Además, los proetasomas mutantes presentan una movilidad electroforética mayor en geles no desnaturalizantes que los proteasomas silvestres, siendo su coeficiente de sedimentación en gradientes de densidad menor. asimismo, los proteasomas obtenidos a partir de las células de la cepa rpn6-a1 han perdido las subunidades que componen la tapa del complejo regula
Datos académicos de la tesis doctoral «Rpn6 es una proteína esencial para mantener la estructura y actividad del proteasoma 26s de saccharomyces cerevisiae«
- Título de la tesis: Rpn6 es una proteína esencial para mantener la estructura y actividad del proteasoma 26s de saccharomyces cerevisiae
- Autor: Patricia González Santamaría
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 26/09/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Miguel Remacha Moreno
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Juan pedro García ballesta
- crisanto Gutierrez armenta (vocal)
- rosario Lagunas gil (vocal)
- Torre ruiz m. ángeles (vocal)