Tesis doctoral de Perira Padilla Gala Patricia
El presente trabajo aporta la investigacion, resultados y discusión de la sobre-expresion de enzimas hidantoinasa y carbamilasa, utilizada en la sintesis de d y l-aminoacidos a partir de mezclas racemicas de hidantoinas. varios aminoacidos se producen a escala industrial para su utilización en farmacia, alimentacion, agricultura, etc. Se pusieron a punto dos de las condiciones de medida de actividad hidantoinasa y carbamilasa de las diversas cepas utilizadas: la relación biomasa húmeda/tiempo de reacción y la permeabilizacion celular. Se estudiaron varias cepas silvestres para seleccionar aquellas con las enzimas hidantoinasa, d-carbamilasa y l-carbamilasa más adecuadas para su utilización futura a escla industrial. Las cinco enzimas escogidas industrial. Las cinco enzimas escogidas fueron clonadas y sobre-expresadas en escherichia coli y agrobacterium tumefacines. Se realizaron estudios preliminares de medida de actividad enzimática con todos los organismos recombinantes obtenidos y se escogieron tres en los que incrementó (utilizando iptg como inductor) la actividad respecto a la de las cepas silvestres. Los tres microorganismos fueron e.Coli bl21 (de3) con la d-carbamilasa de agrobacterium tumefaciens a158 bajo control del promotor 010 del vector pbsk y e. Coli dh5a con la l-carbamilasa de bacillus stearothermophilus a245 bajo control del promotor lac del vector pbsk y e.Coli dh5a con la hidantoinsasa de agrobacterium tumefaciens a244 bajo control del promotor lac del vector pbsk. Con dichos organismos se llevaron a cabo experimentos de optimizacion de la expresión de las enzimas mediante diseño experimental y fermentaciones de laboratorio, a fin de obtener la maxima actividad enzimática y crecimiento posibles sin utilizar iptg ni antibiotico.
Datos académicos de la tesis doctoral «Sobre-expresion de enzimas hidantoinasa y carbamilasa«
- Título de la tesis: Sobre-expresion de enzimas hidantoinasa y carbamilasa
- Autor: Perira Padilla Gala Patricia
- Universidad: Almería
- Fecha de lectura de la tesis: 25/01/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Escalera Hueso Santiago De La
- Tribunal
- Presidente del tribunal: María dolores Suarez ortega
- carmen francisca Barón bravo (vocal)
- Lazaro paniagua Juan José (vocal)
- joaquín Moreno casco (vocal)