Tesis doctoral de José Luis Abad Minguez
En este trabajo se describe la construcción y caracterización de una nueva familia de vectores retrovirales derivados del virus de la leucemia murina (mo-mlv). Todos ellos se han generado con el objetivo final de ser empleados en el desarrollo de protocolos pre-clínicos de terapia génica somática, y de poder obtener, de forma rápida y eficiente, pequeños lotes de las partículas virales correspondientes para su evaluación preliminar. esto se consigue mediante el uso del sistema de empaquetamiento transitorio, utilizando la linea celular 293t, puesto a punto en el laboratorio durante el transcurso de esta tesis. el esquema de expresión de los vectores atiende a una estrategia bicistrónica, donde tanto el gen de interés (terapéutico) como el correspondiente marcador de selección se encuentran bajo el control del mismo promotor (ltr), y se co-expresan gracias a la inserción de una secuencia de entrada del ribosoma (ires) localizada entre ambas unidades. Se han construído cuatro vectores distintos, utilizando marcadores de selección independientes (lacz, ahngfr, ahghr y egfp). Todos ellos son útiles en distintas fases del desarrollo de los protocolos pre-clínicos. La nueva familia de vectores se ha contrastado tanto en lo relativo a eficiencia de empaquetamiento y capacidad para infectar células primarias murinas y humanas, estabilidad de la expresión y bioseguridad. tras la evaluación de las nuevas herramientas desarrolladas, éstas se utilizaron para abordar el modelo funcional que ha sido objeto central de esta tesis: inhibición funcional de la expresión en superficie de la molécula ccr5, un receptor de quimioquinas, con especial dedicación al modelo de infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (hiv-1). se diseñaron, construyeron y evaluaron varias construcciones con potencial de inhibición atendiendo a distintos mecanismos. Inicialmente se ensayaron en sistemas celulares mediante ensayos de co-tra
Datos académicos de la tesis doctoral «Terapia génica somática frente a la infección por hiv-1. inmunización intracelular de células t periféricas mediante inhibición de la expresión en superficie del correceptor ccr5«
- Título de la tesis: Terapia génica somática frente a la infección por hiv-1. inmunización intracelular de células t periféricas mediante inhibición de la expresión en superficie del correceptor ccr5
- Autor: José Luis Abad Minguez
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 15/03/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Antonio Bernad Miana
- Tribunal
- Presidente del tribunal: balbino José (secretario) Alarcon sanchez
- Rafael Delgado vazquez (vocal)
- Juan Antonio Bueren roncero (vocal)
- (vocal)