Tesis doctoral de Pereda Vega José M.
Se ha empleado la proteolisis limitada del dimero nativo de alfabeta-tubulina con 12 proteasas diferentes para localizar zonas superficiales de la molecula. La identificacion inicial de los fragmentos se ha realizado mediante inmunorectividad con un conjunto de 9 anticuerpos con especificidad de secuencia. La posterior microsecuenciacion del extremo amino terminal de los fragmentos ha permitido localizar con precision 18 puntos de corte. La digestion de la tubulina ocurre preferentemente en 4 regiones de la secuencia (denominadas a, b, c y d). Una nueva zona sensible a proteolisis a ha sido localizada cerca del residuo alfalys-40, y alrededor de las posiciones 50-100 en la beta-tubulina. Las otras 3 regiones parecen corresponder, con menores cambios, a las zonas propuestas con anterioridad (de la viña et al. (1988) biochemistry 27:5352-5356). La region b se extiende entre las posiciones 160 a 190. La region es mas extensa e incluye desde las posiciones 275 a 360. La region d se localiza en el extremo carboxilo terminal. la proteolisis limitada comparada de tubulina no ensamblada, microtubulos inducidos por taxol y hojas inducidas por zn2+, rinde informacion sobre la orientacion espacial de los residuos accesibles. La zona a sensible a proteolisis es accesible en alfa-tubulina ensamblada, en concordancia con la acetilacion de la alfa-tubulina polimerizada en el residuo lys-40 (ledizet y piperno (1987) proc. Natl. Acad. Sci. Usa 84:5720-5724). La zona b, adyacente a la region rica en gly caracteristica de tubulinas, es accesible tambien en la forma polimerizada. En la zona c, los puntos de corte que se protegen en la polimerizacion se localizan en dos areas definidas: cerca del residuo 280 en alfa-y beta-tubulina y en los residuos 339-340 en alfa-tubulina. la region d se protege parcialmente en alfa-tubulina en el ensamblaje, pero no en beta-tubulina. los resultados de proteolisis limitada introducen restricciones estructur
Datos académicos de la tesis doctoral «Zonas de la superficie del dimero de alfa beta-tubulina y de los microtubulos: proteolisis limitada y analisis de secuencias multiples.«
- Título de la tesis: Zonas de la superficie del dimero de alfa beta-tubulina y de los microtubulos: proteolisis limitada y analisis de secuencias multiples.
- Autor: Pereda Vega José M.
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1996
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Andreu Morales José Manuel
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Manuel Ruiz Amil
- José María Valpuesta Moralejo (vocal)
- Francisco García Blanco (vocal)
- Alfonso Valencia Herrera (vocal)