Tesis doctoral de Cristian Alejandro Córdova Jiménez
La utilización del semen porcino en la ia se ha decantado sobre todo, del lado del semen refrigerado, debido a que las características de la membrana del espermatozoide porcino, hacen que la congelación y descongelación del semen provoque una marcada diminución en la viabilidad de las células espermáticas. Por lo tanto las ventajas que supone la congelacion de material seminal, como; mayor control sanitario que se puede ejercer, una mayor capacidad de almacenamiento en espacio y tiempo, además de la capacidad de mantener posible la ia con semen de alto valor genético a lo largo de mucho tiempo aun cuando el macho donante no se encuentre en el mismo sitio o ya no exista pierdan cierto valor. En cuanto al semen refrigerado, la conservación de las dosis seminales a 15°c supone menos complejidad en el momento de ia, además de que la preparación en más fácil y la pérdida de la calidad espermática no es tan acusada con en el caso del semen criopreservado. el centro tecnológico se inseminación (centrotec), donde se realiza este trabajo, prepara un gran número de dosis seminales todas la semanas, estas dosis son refrigeradas a 15°c, dichas dosis tienen una fecha límite de uso, esta fecha de caducidad viene dada en función de las pruebas que se realizan para determinar hasta qué punto en el tiempo, los espermatozoides de las dosis seminales mantienen su calidad, en cuanto a la integridad de la membrana plasmática, integridad del acrosoma y una movilidad, parámetros que deben presentar niveles aceptables. La disminución de dichos parámetros determina hasta que fecha es prudente o no emplear la dosis en el ia. Esta situación repercute directamente sobre los el numero de granjas a las cuales se les pueden enviar las dosis, dependiendo de la distancia del centro de producción. ya sea en semen refrigerado o congelado-descongelado, existen fenómenos que determinan la resistencia de las células espermáticas a la conservación, provocando daño a los espermatozoides, en este trabajo, se ha considerado al proceso de pl como uno de los más importantes, puesto que ocurre de manera inevitable, pues el propio metabolismo (respiración) de los espermatozoides es precursor de este proceso dañino. por tal motivo es que el objetivo principal de este trabajo es, intentar mediante la incorporación de compuestos antioxidantes (vitamina e-200µm- y glutatión reducido-5mm-), en el diluyente de las dosis refrigeradas a 15°c y en el diluyente de refrigeración empleado en el proceso de congelación del semen, con la finalidad de disminuir el daño que se produce, en los dos tipos de conservación, a los parámetros de calidad seminal y de la misma forma la presencia de pl. para lograr realizar los objetivos planteados, se distribuyó el trabajo experimental en dos experimentos, el primero de ellos se basa en la valoración del efecto de los antioxidantes sobre dosis comérciales, elaboradas de la misma manera que se hace para su comercialización y conservadas mediante refrigeración a 15ºc durante 7 días, las concentraciones utilizadas son 200µm en el caso del análogo de la vitamina e y para el caso del glutatión reducido de 5mm. Se realizaron pruebas de la integridad de la membrana mediante su análisis con tinción con ioduro de propidio/carboxifluoresceina clasificando a los espermatozoides como vivos o muertos si presentaban coloración verde o roja respectivamente, los resultados se expresan como porcentaje de células vivas, en el caso del análisis del estado del acrosoma se empleo contraste de fases negativo, cuantificando en número de células sin ningún tipo de alteración en el acrosoma, de igual forma los resultados se expresan en porcentaje de células con el acrosoma intactos, en cuanto a la movilidad esta se evaluó con la ayuda de un programa informático (isas®), con el cual se analiza el porcentaje de movilidad, y la evolución de los parámetros cinéticos (vcl, vsl, vap, lin, str, wob, alh, bcf). en cuanto a la presencia de peroxidación lipídica, esta se valora mediante la cuantificación de mda, que es un producto de la pl, empleando la técnica de los tbars, los resultados se expresan como mmoles de tbars/106 de espermatozoides. Todas las valoraciones realizadas con la finalidad analizar en efecto de los antioxidantes sobre las dosis seminales porcinas, se realizaron en el día 0, día 5 y día 7 después de la extracción del semen. para la realización del segundo experimento, se emplearon los mismos antioxidantes y en las mismas concentraciones que en el caso del primer experimento. La incorporación de dichos antioxidantes de realiza en el diluyente de refrigeración durante el proceso de congelación del semen de verraco, con la intención de proteger a las células espermáticas, desde el inicio del descenso se temperatura. se emplearon las mismas técnicas que en el primer experimento para valorar los distintos parámetros de calidad seminal y pl, una vez hecha la descongelación se sometió a las células espermáticas a un estrés por calor, mediante una incubación a 37°c durante 4 horas, las valoraciones se realizaron al momento de la descongelación y hasta 4 horas siguientes. Por otra parte la cuantificación del mda se realizó a los 30 min tras la descongelación. los resultados obtenidos tras la realización de todas las pruebas, muestran el efecto protector que los antioxidantes tienen sobre los parámetros de calidad espermática, durante los 7 días de incubación de las dosis seminales y durante las 4 horas de incubación del semen descongelado en un test de termorresistencia, los grupos que contienen ya sea el análogo de la vitamina e o gsh, presentan los valores más altos en cuanto a porcentaje de células espermáticas que mantenían intacta su membrana y así mismo mantenían intacto su acrosoma, en cuanto al mantenimiento de la movilidad espermática, los grupos suplementados con antioxidantes presentaron los porcentajes de movilidad más altos y mejor calidad de movimiento durante la incubación. a pesar de que los dos antioxidantes empleados funcionaron favorablemente en comparación al grupo control, es importante destacar que los mejores resultados a los largo de la experiencia, en semen refrigerado y en semen descongelado, se aprecian en el grupo que contiene gsh. En cuanto a la presencia de pl los antioxidantes muestran claramente un efecto positivo, pues los grupos que contenían el análogo de la vitamina e o gsh, presentaron los niveles más bajos de mda, en semen refrigerado y descongelado, aunque específicamente el semen descongelado entre el grupo que contenía vitamina e y el control no se constata diferencia estadísticamente significativa los valores del grupo que contiene antioxidante muestra valores más bajos de mda. Siendo una vez más el gsh el que presenta los mejores resultados para los dos tipos de conservación seminal. por lo tanto la adición de los antioxidantes en el diluyente para la preparación de dosis comerciales manifestó tener un efecto positivo sobre la disminución de la pl y como consecuencia mantener los parámetro de calidad seminal en niveles aceptables, por lo tanto se podría plantear la posibilidad de poder ampliar la fecha límite de utilización de las dosis. en cuanto a la incorporación de antioxidantes previamente a la congelacion del semen, se comprobó que funciona de manera favorable en el mantenimiento de la calidad espermática y presencia de pl, lo que puede ser una adecuada acción en el campo de la criopreservación de semen porcino.
Datos académicos de la tesis doctoral «Control de la peroxidación lipídica del semen refrigerado y criopreservado de verraco mediante antioxidantes (¿-tocoferol / glutatión reducido), y su repercusión sobre la calidad espermática.«
- Título de la tesis: Control de la peroxidación lipídica del semen refrigerado y criopreservado de verraco mediante antioxidantes (¿-tocoferol / glutatión reducido), y su repercusión sobre la calidad espermática.
- Autor: Cristian Alejandro Córdova Jiménez
- Universidad: León
- Fecha de lectura de la tesis: 19/11/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Carlos Dominguez Fernandez De Tejerina
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ana Obeso caceres
- lina Fernández celadilla (vocal)
- José felix Pérez gutiérrez (vocal)
- Fernando Tejerina ampudia (vocal)