Tesis doctoral de Antonio Pérez M. Carmen De
La alfa-sarcina es una citotxina secretada por aspergillus giganteus que contiene dos triptófanos conservados en las posiciones 4 y 51. se han preparado dos mutantes individuales, sustituyendo cada residuo por uan phe. Los dos mutantes individuales, y el doble, se han producido, aislado y purificado. Además, se han caracterizado estructural y enzimáticamente, y se ha estudiado su capacidad para interaccionar con vesículas de fosfolípidos. de acuerdo con los resultados, ninguno de los dos triptófanos es necesario para que la enzima tenga su actividad ribonucleolítica específica frente a los ribosomas. la resonancia magnética nuclear de protón revela que la estructura global de la enzima se mantiene tras las mutaciones. Ello ha permitido evaluar la contribución individual de cada uno de los trp a los espectros de dicroísmo circular y de emisión de fluorescencia de la proteína. La termoestabilidad de los mutantes, por el contrario, sí es menor. en cuanto al estudio de la interacción con los lípidos, se ha puesto de manifiesto que al unirse a las membranas se destabiliza la proteína. sin embargo, no cambia su patrón de interacción con vesículas modelo compuestas por fosfolípidos ácidos, en términos de agregación de las mismas, mezcla de lípidos o pérdida de contenidos acuosos. todos estos estudios han permitido definir, tras la interacción de los mutantes purificados con vesículas lipídicas en las que se había incorporado antraceno, que el trp-51 se incorpora a la región hidrofóbica de la bicapa. este resultado indica que la región que rodea a este residuo se localiza en el nucleo hidrofóbico de la proteína que es responsable de su capacidad para atravesar membranas.
Datos académicos de la tesis doctoral «Contribución de los triptófanos a la estructura y funcionalidad de la ribotoxina alfa-sarcina«
- Título de la tesis: Contribución de los triptófanos a la estructura y funcionalidad de la ribotoxina alfa-sarcina
- Autor: Antonio Pérez M. Carmen De
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 26/11/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Martínez Del Pozo álvaro
- Tribunal
- Presidente del tribunal: josé Canilanes franco
- pilar Lillo villalobos (vocal)
- Marta Brmix bayes (vocal)
- Antonio Rodríguez Juan (vocal)