Tesis doctoral de Eddy Caro Azoy
Este trabajo aborda el desarrollo de nuevas metodologías para la expresión estable de genes mesófilos en thermus thermophilus. Se realizó la selección funcional de dos proteínas, una glucosamina-6-p-sintasa híbrida, obtenida por fusión del cominio amino terminal (nt) de thermus thermophilus y el dominio carboxilo (ce) de e.Coli, obteniendo un gen quimérico que se inserto mediante recombinación en el cromosoma de la bacteria termófila y se procedió posteriormente a su selección en el cromosoma de la bacteria termófilia y se procedió posteriormente a su selección funcional a temperaturas crecientes bajo condiciones nutricionales restrictivas. Al tratarse de un gen vital, relacionado con la síntesis del peptidoglicano de la pared celular, su expresión y posterior selección en «batch», condujo a la sobreexpresión de la proteína como respuesta termoadaptativa, probablemente por alteración de un gen regulador no identificado. El otro gen clonado, xhis1, procedente de strptomyces halstedii jm8, codifica una beta-1,4-endoxilanasa que es secretada el medio de cultivol la expresión y posterior selección del enzima en presencia de xilano como fuente de carbono a temperaturas crecientes hasta 70ºc, provocó la selección de mutaciones en la región -10 del promotor de slpa (gen que codifica la proteína principal de la capa s de thermus), que conllevaron a una sobreexpresión de la misma, lo que permitió el crecimiento de thermus thermophilus a expensas de un sustrato macromolecular. Este trabajo ofrece nuevas alternativas a la posibilidad de seleccionar enzimas termoestables mediante metodologías de evolución dirigida.
Datos académicos de la tesis doctoral «Expresión y selección funcional de proteínas de bacterias mesófilas en thermus thermophilus«
- Título de la tesis: Expresión y selección funcional de proteínas de bacterias mesófilas en thermus thermophilus
- Autor: Eddy Caro Azoy
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 24/11/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- José Berenguer Carlos
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ricardo Amils pibernat
- i. Santamaria ramm (vocal)
- María José Bonete pérez (vocal)
- Ana Arraztio garcia (vocal)